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锌指抗病毒蛋白(ZAP,zinc-finger antiviral protein)可以特异性的抑制细胞质中鼠白血病病毒和一些甲病毒属的病毒复制。以前的研究发现,ZAP可以直接与病毒RNA结合并招募RNA外切酶复合体exosome降解病毒RNA。在本文中我们将进一步探讨ZAP的作用机制。
通过免疫共沉淀实验,我们发现ZAP和p72之间的相互作用是不依赖于RNA而存在的。体外pull-down实验进一步证明ZAP和p72之间存在直接的相互作用。并且通过截短体之间的相互作用实验,确定出了ZAP与p72之间相互作用的位点在N端,而p72的N端和C端都可以与ZAP相互作用。
过量表达p72可以促进ZAP降解RNA,而过量表达p72的C端和p72的突变体能抑制ZAP的功能。通过shRNA敲低内源p72的水平后,ZAP抗病毒的活性也会明显下降,但对TTP降解含有ARE的mRNA没有明显的影响。
随后我们初步探讨了p72影响ZAP降解RNA的机制。在甘油密度梯度离心中,p72与Dcp2的分布一致,而且免疫共沉淀实验和体外pull-down实验也表明p72与Dcp2之间存在直接的相互作用。
同时我们设计了一种新的筛选方法寻找影响ZAP功能的蛋白因子,尽管没有发现有效的蛋白,但我们建立了一个初步筛选的平台,并为进一步的筛选积累了经验。