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牙胚的发育涉及到一个十分复杂的过程,包括上皮与间充质问有序的相互作用,生长因子之间及其与细胞外基质成分之间的相互作用等过程,在上述因素的联合作用下,牙胚发育至一定阶段出现分泌釉基质和牙本质基质的成釉细胞和成牙本质细胞的分化。随着分子生物学和基因技术的飞速发展,对牙胚发育尤其是成牙本质细胞分化过程的研究已进入分子机理和基因调控的水平。目前,一些神经源性的因素在非神经系统的生物学效应已受到广泛重视。神经生长因子的研究就经历了从周围神经系统进入中枢神经系统,继而扩展至非神经系统3个发展阶段。与其它生长因子一样,神经生长因子也是一个多功能的生长因子,二者之间已无明显界限。神经生长因子和间充质源性的速激肽在牙胚发育不同阶段的表达,提示其与牙胚的生长、分化密切相关。本研究通过牙乳头间充质细胞和牙胚的体外培养,从细胞和分子水平探讨了神经生长因子和神经肽对牙乳头间充质细胞和牙胚生长、分化的影响。实验分为3个部分:1.神经生长因子和神经肽对体外培养的人牙乳头间充质细胞的生物学效应;2.神经肽在人正常牙髓成牙本质细胞层分布的免疫组化研究;3.神经生长因子和神经肽与大鼠牙胚生长、分化关系的研究。 1 神经生长因子和神经肽对体外培养的人牙乳头间充质细胞的生物学效应 采用组织块法培养了人牙乳头间充质细胞,ABC免疫组化染色,细胞呈波形丝蛋白阳性,角蛋白阴性,提示细胞来源于外胚间叶组织。采用~3H-TdR掺入法检测不同浓度的SP、CGRP和NGF对培养的第4代人牙乳头间充质