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氟苯尼考（Florfenicol,FF）和甲砜霉素（Thiamphenicol,TAP）作为新型氯霉素类广谱抗生素,被广泛用于兽医临床上细菌感染性疾病的预防和治疗,也经常被滥用及非法添加到动物饲料、注射药剂及内服药剂中。但由于氟苯尼考及甲砜霉素在动物源性食品及环境中的残留易导致致病菌株产生耐药性,且二者对于人体及动物均具有血液毒性、免疫毒性和胚胎毒性等毒性,威胁消费者健康。因此,加强对此类药物的监控、控制二者在动物性食品中的残留很有必要。目前对氟苯尼考及其代谢物氟苯尼考胺（Florfenicolamine,FFA）、甲砜霉素的分析手段主要有液相色谱、液相色谱-串联质谱法等仪器法,仪器法准确可靠,但存在成本高、操作复杂耗时、通量低、不易普及等不足。免疫分析法具有快速、灵敏、低成本、易于现场操作等特点,作为初筛方法,可与仪器法搭配使用,满足大批量样品的快速筛查需求。本文以氟苯尼考、氟苯尼考胺及甲砜霉素为研究对象,设计合成系列半抗原并制备了有效单克隆抗体及多克隆抗体,通过对抗体-包被原的组合筛选,建立了三种不同检测性能的间接竞争酶联免疫分析法。主要研究内容和结果如下:（1）以氟苯尼考及甲砜霉素结构为基础制备了6种相关半抗原（FF、FFA、FFD、FFM、FFAC、TAPN）,偶联载体蛋白后通过动物免疫获得抗血清。经鉴定,鼠抗血清FFD-BSA和FFD-KLH能够特异性识别检测对象,同源包被条件下效价均为1:128000,对1μg/mL的氟苯尼考抑制率分别为80%和74%。进一步用以上两种免疫抗原制备兔抗血清及鼠源单克隆抗体,经过抗体-包被原筛选,得到不同检测效果的抗体-包被原组合。（2）基于兔多抗pAb-FFD-KLH1与包被原FFM-OVA,建立了同时检测氟苯尼考和甲砜霉素残留的间接竞争酶联免疫分析方法（ciELISA）。该方法对于氟苯尼考的IC50为1.32 ng/mL,线性检测范围为0.31-5.61 ng/mL,检出限为0.12 ng/mL;对于甲砜霉素的IC50为3.21 ng/mL,线性检测范围为0.6-17.01 ng/mL,检出限为0.24 ng/mL;与氯霉素等多种类似物均无交叉反应,方法特异性好;室温下试剂盒可存放6天,4℃保存期达半年,稳定性较好;不同时间包板,试剂盒灵敏度变化较小,精密度高;经样品前处理和倍比稀释法消除基质干扰后,鸡肉、猪肉、牛肉、猪饲料、鸡饲料中氟苯尼考和甲砜霉素的添加回收率均在77%-116%之间,变异系数<16%,与HPLC-MS/MS方法检测结果相关性良好。（3）基于兔多抗pAb-FFD-KLH2与包被原FF-OVA,建立了同时检测氟苯尼考和氟苯尼考胺残留的间接竞争酶联免疫分析方法。该方法对于氟苯尼考的IC50为8.94ng/mL,线性检测范围为2.32-34.46 ng/mL,检出限为1.06 ng/mL;对于氟苯尼考胺的IC50为10.96 ng/mL,线性检测范围为3.05-39.45 ng/mL,检出限为1.45 ng/mL;与多种类似物均无交叉反应,方法特异性好;室温下试剂盒可存放6天,4℃保存期达半年,稳定性较好;不同时间包板,试剂盒灵敏度变化较小,精密度高;经样品前处理和倍比稀释法消除基质干扰后,鸡肉、猪肉、牛肉中氟苯尼考和氟苯尼考胺的添加回收率均在64.8%-96.4%之间,变异系数<15%,与HPLC-MS/MS方法检测结果相关性良好。（4）基于鼠单抗mAb-FFD-BSA与包被原FFD-OVA,建立了特异性检测氟苯尼考的间接竞争酶联免疫分析方法。该方法对于氟苯尼考的IC50为9.48 ng/mL,线性检测范围为1.75-51.36 ng/mL,检出限为0.64 ng/mL;与多种类似物均无交叉反应,方法特异性好;室温下试剂盒可存放6天,4℃保存期达半年,稳定性较好;不同时间包板,试剂盒灵敏度变化较小,精密度高;经样品前处理和倍比稀释法消除基质干扰后,鸡肉、猪肉、牛肉、猪饲料、鸡饲料中氟苯尼考的添加回收率在88%-108%之间,变异系数<15%,与HPLC-MS/MS方法检测结果相关性良好。