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背景随着现代化交通和工业的发展,脊髓损伤的发病率正在逐年增加。脊髓损伤常继发于脊柱的暴力外伤,病人以脊髓受伤平面以下肢体的运动障碍为主要表现,其病理生理机制以神经细胞的凋亡最受关注。近几年来,应用神经干细胞治疗脊髓损伤的研究日益成为重点和热点。已有实验研究表明,针刺治疗能促进脊髓损伤动物内源性神经干细胞的增殖和分化。临床上也陆续有应用针刺督脉经穴和夹脊穴治疗脊髓损伤成功的报导。因此我们设想针刺督脉经穴和夹脊穴是通过原位诱导脊髓内源性神经干细胞的增殖来修复脊髓损伤,从而改善或治愈截瘫的。目的本实验利用改良Allen WD脊髓损伤动物模型模拟临床上针刺督脉经穴和夹脊穴治疗脊髓损伤的过程,观察针刺治疗过程中动物模型双后肢神经功能恢复的情况以及脊髓内源性神经干细胞的增殖情况,研究针刺督脉经穴和夹脊穴对脊髓损伤大鼠神经功能恢复和内源性神经干细胞增殖的影响。进一步分析内源性神经干细胞的增殖与神经功能恢复之间的联系,以及针刺原位诱导脊髓内源性神经干细胞增殖的机制,为揭示针刺治疗脊髓损伤的机理提供新的理论依据。方法取SPF级6周龄SD大鼠50只以改良Allen WD法制作第十胸椎水平急性重度脊髓挫伤模型。模型随机分为:①针刺组24只,②对照组24只,③空白组2只。针刺组和对照组又随机分为14、30、60和90d四个时间点,每个时间点6只。空白组制作模型后4小时取材进行HE染色,观察切片组织损伤的程度。针刺组每天针刺督脉经穴和夹脊穴一次,对照组不针刺;两组分别在术后1、14、30、60和90d用Tarlov评分和IP评分评价双后肢功能;两组模型在取材前连续三天腹腔注射BrdU Bid标记相应时间增殖的内源性神经干细胞,按不同时间点分别于术后14、30、60和90d评分后取伤段脊髓进行HE染色和抗BrdU免疫组化染色,观察两组动物在不同时间点脊髓形态学特点,观察各切片BrdU阳性细胞数目及分布情况;进行统计分析比较两组之间不同时间点BrdU阳性细胞数目的差异。结果空白组HE染色见脊髓内部结构轻度破坏,以脊髓背侧为主,散在小出血灶和小片状坏死灶,白质神经纤维水肿。功能评分显示在各时间点针刺组双下肢功能改善与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),功能改善与治疗时间延长平行。对照组脊髓病理性重构、神经元凋亡日趋加重;针刺组脊髓结构逐渐恢复正常,多数神经元变性可逆最后恢复正常。免疫组化染色显示不同时间点针刺组和对照组之间BrdU阳性细胞数差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论针刺督脉经穴和夹脊穴在近期(14d)到远期(90d)均能有效促进脊髓损伤大鼠后肢神经功能恢复;有效阻止受损脊髓不可逆的细胞凋亡和病理性重构,大大降低病理损害程度;原位诱导内源性神经干细胞的增殖;内源性神经干细胞的增殖在大鼠后肢神经功能恢复上可能起关键作用。脊髓背侧挫伤模型动物脊髓神经干细胞增殖大部分出现在脊髓后角和后索(即伤侧);损伤上段、损伤段和损伤下段中神经干细胞增殖以损伤下段(尾侧)为著,损伤段次之。