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目的:成功构建并鉴定过表达miR-126慢病毒载体系统,筛选最佳MOI,转染BMSCs;将转染过表达miR-126的BMSCs植入SCI模型大鼠体内,观察移植后SD大鼠体内miR-126 BMSCs的存活、分布及迁移情况。方法:1.从SD大鼠股骨和胫骨中分离和培养骨髓间充质干细胞(BMSCs),鉴定其干细胞能力和细胞表型特性;2.构建并鉴定过表达miR-126慢病毒载体系统,将其成功转染BMSCs,筛选最佳MOI;3.用荧光定量PCR鉴定过表达miR-126转染后的BMSCs表达miR-126增殖倍数能力,验证miR-126 BMSCs能稳定的传代,并对BMSCs形态、活性及干细胞特性无影响。4.采用改良的Allen法,成功创建50例SD大鼠脊髓损伤模型,分为两组,分为过表达miR-126 BMSCs移植组、空白载体GFP移植组,一组25只。5.将过表达miR-126慢病毒载体系统转染的BMSCs移植至SD大鼠急性脊髓损伤模型体内,并建立空白载体GFP移植SD大鼠SCI体内作为对照组;在细胞移植术后的12h、1天、3天、1周、2周,将两组大鼠模型的术野脊髓切片,通过荧光显微镜观察BMSCs的细胞数量、迁移情况及在模型体内存活时间。结果:1.成功培养制备全骨髓贴壁法培养骨髓间充质干细胞(BMSCs),可体外分化成成骨细胞、脂肪细胞,CD34、CD45、CD29、CD44表型鉴定。2.成功构建并鉴定过表达miR-126慢病毒载体系统,经293T细胞包装、筛选稳定过表达miR-126的BMSCs,确定最佳感染复数(MOI)为40。MOI为40时,过表达miR-126慢病毒转染效率高,转染后,BMSCs miR-126获得高表达,表达量约为空白BMSCs表达量的6倍。BMSCs经过表达miR-126慢病毒载体系统转染后,miR-126 BMSCs能稳定的传代,并对其形态、活性及干细胞特性无影响。3.50例SD大鼠脊髓损伤模型,分为过表达miR-126 BMSCs移植组、空白载体GFP移植组,一组25只。移植后分别在术后12h、1天、3天、1周、2周,5个不同时间点取大鼠模型脊髓切片,免疫荧光染色后观察。免疫荧光染色结果:所有实验数据均采用SPSS19.0软件处理,单因素方差分析ANOVA检验比较各组数值,过表达miR-126 BMSCs组与GFP组在五个不同时间点的显著性(Sig)均大于P,P=0.05,无统计学意义,两组无显著性差异。说明过表达miR-126 BMSCs移植大鼠体内后,能够存活一定时间。结论:1.该实验采用慢病毒载体系统进行过表达miR-126的转染BMSCs,能够在体外进行高效的整合及表达,miR-126 BMSCs能稳定的传代,并对其细胞形态、生长增殖及诱导分化能力无影响,2.本次结果说明过表达miR-126 BMSCs移植大鼠体内后,细胞能够存活一定时间,为下一步在体内研究miR-126在BMSCs调控机制打下实验基础。