茶树组培再生体系建立及叶发育相关YABBY基因的功能验证

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xingfuli2009
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茶树遗传转化技术迄今为止没有被建立,主要受制于茶树农杆菌转化效率低下和茶树再生速度缓慢两个问题。目前已经有基于发根农杆菌转化产生茶树毛发根的报道。而茶树再生过程中,愈伤组织诱导率低、幼苗畸形率高和幼苗生长缓慢的问题亟待解决。本研究,首先优化了茶树愈伤诱导体系并完善茶树再生体系,接着基于农杆菌介导的基因瞬时表达技术,比较了茶树不同组织器官的基因瞬时表达效率,筛选了促进茶树愈伤再生的相关基因。本研究论文期望通过上述研究,为茶树遗传转化体系的建立提供一些理论和实验基础。主要的结论如下:1.本文优化了茶树不同组织器官愈伤组织诱导的培养基并筛选合适的品种资源。结果显示,4号培养基是茶树叶片诱导愈伤最佳培养基。筛选出的茶树品种类似英红、云抗大叶种茶树。2.本文建立了使用茶树叶片作为外植体的不定芽诱导体系,以及使用茶树子叶作为外植体的胚状体诱导体系。茶树叶片愈伤诱导流程如下:黑暗条件下在4号培养基上诱导愈伤,继代于3号培养基,此后每隔1月继代一次直到愈伤出芽。茶树子叶愈伤诱导流程如下:黑暗条件下在B5培养基诱导愈伤,诱导出的愈伤继代至胚性愈伤培养基KBN,此后每隔1月继代一次直到体细胞胚出现,将体细胞胚切下放置在MSK培养基上生长。3.结果显示,茶树幼苗下胚轴为合适的进行茶树基因瞬时表达的材料。4.过表达CsFILa和CsFILb的转基因拟南芥植株叶片背卷,狭长;过表达CsFILb和CsYAB2的转基因烟草叶片皱缩。基于这些结果,本文推测茶树三条YAB基因参与调控植物叶片的发育,这个工作为今后完善茶树遗传转化体系提供了候选基因。
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