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目的:本课题通过体外细胞实验,研究木榄叶乙醇提取物及其3个溶剂萃取部位对肿瘤细胞的体外抑制作用,筛选木榄叶抗肿瘤活性部位。继而进一步研究木榄叶抗肿瘤活性部位对胰腺癌SW1990细胞的增殖、侵袭、迁移、细胞凋亡等影响作用,并阐明木榄叶抗肿瘤活性部位抗胰腺癌的作用及分子机制。方法:1.采用MTS方法检测木榄叶乙醇提取物及其3个溶剂萃取部位对7种恶性肿瘤细胞增殖的影响。实验设置5个浓度梯度给药组（31.25、62.50、125.00、250.00、500.00μg/ml）,和对照组,每组2个复孔。给药24、48、72 h后,根据说明书用MTS试剂检测细胞活力,筛选药效较强的木榄叶抗肿瘤活性部位和敏感细胞株;2. 采用单细胞克隆形成实验检测木榄叶乙酸乙酯部位对胰腺癌SW1990细胞克隆形成能力的影响。在六孔板中加入胰腺癌SW1990细胞,其细胞数目为400个/孔,设置给药组（50、30、20、10μg/ml）及对照组,于给药第8天用结晶紫染色扫描计数,计算克隆形成率;3. 采用划痕实验检测木榄叶乙酸乙酯部位对胰腺癌细胞SW1990迁移能力的影响。设置给药组（150、100、50、25μg/ml）、对照组,分别于给药后0和24 h拍照,运用Image J进行伤口面积分析,计算细胞向中间移动距离;4.采用Transwell侵袭实验检测木榄叶乙酸乙酯部位对胰腺癌SW1990细胞株侵袭能力的影响。设置给药组（60、30、15μg/ml）)和对照组,处理24 h后转移至Transwell侵袭小室,孵育22 h后用结晶紫染色,去除上室细胞后拍照,运用Image J计算穿过小室的细胞数;5.采用流式细胞术检测木榄叶乙酸乙酯部位对胰腺癌细胞SW1990细胞凋亡的影响。设置给药组（150、100、50、25μg/ml）和对照组,处理24、48、72 h后,按照凋亡试剂盒说明书处理细胞,用流式细胞仪检测细胞凋亡率;6.采用Western blot法检测木榄叶乙酸乙酯部位对胰腺癌SW1990细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响,设置给药组（150、100、50、25μg/ml）和对照组,处理24 h后提取蛋白,对蛋白变性后进行电泳,转膜,封闭,孵育相应的一抗和二抗,测定凋亡基因Caspase-3、Bax、Bcl-2基因蛋白表达情况;7.采用免疫细胞化学（ICC）法检测木榄叶乙酸乙酯部位对胰腺癌SW1990细胞凋亡相关基因蛋白表达的影响,设置给药组（150、100、50、25μg/ml）和对照组,处理胰腺癌细胞,24 h后高内涵成像系统拍摄图片,测定凋亡基因Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达的荧光强度。结果:1.MTS增殖实验结果显示,木榄叶不同化学部位对SK-OV-3、SK-MES-1、MDA-MB-231、Bel-7402、T24、PC3、HT-29这7种细胞24、48、72 H的IC50值均大于100μg/ml。木榄叶4个化学部位对胰腺癌细胞SW1990的IC50值中,木榄叶乙酸乙酯部位的IC50值最小,其24、48、72 h的IC50值分别为88.76、52.67、84.17μg/ml。;2.单细胞克隆形成实验显示,随着木榄叶乙酸乙酯部位给药浓度的增加,克隆形成率逐渐降低,在浓度为20μg/ml,10μg/ml时,胰腺癌细胞SW1990的克隆形成率分别降低到40%和20%,与空白对照组（72%）相比具有统计学差异（P<0.05）;3.木榄叶乙酸乙酯部位提取物对胰腺癌细胞SW1990迁移影响实验结果显示,在24 h,木榄叶乙酸乙酯部位给药浓度为100μg/ml,150μg/ml时,胰腺癌SW1990细胞的迁移距离（用像素表示）分别为3.60,1.73,与对照组相比具有统计学差异（P<0.05）,表明木榄叶乙酸乙酯部位可抑制胰腺癌细胞株的迁移;4. 木榄叶乙酸乙酯部位对胰腺癌SW1990细胞的侵袭实验结果显示,在24 h,木榄叶乙酸乙酯部位提取物给药浓度为30μg/ml、60μg/ml时,穿过小室的胰腺癌SW1990细胞数分别为75.67个与58.61个与空白组穿过86.39个相比明显减少（P<0.05）,这表明木榄叶乙酸乙酯部位可抑制胰腺癌细胞SW1990的侵袭;5. 木榄叶乙酸乙酯部位提取物诱导胰腺癌细胞SW1990细胞凋亡的实验结果显示,药物高剂量组（150μg/ml）在24、48、72 h的细胞总凋亡率分别是2.85%、5.39%、10.34%。且随着时间的推移与药物浓度的增加,木榄叶乙酸乙酯部位提取物诱导胰腺癌SW1990细胞凋亡率越高。6. Western blot检测发现木榄叶乙酸乙酯提取物可以上调调胰腺癌SW1990细胞的Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达,下调Bcl-2/Bax的蛋白比值。7. 应用免疫细胞化学的方法检测木榄叶乙酸乙酯提取物对胰腺癌SW1990细胞凋亡相关蛋白的影响,结果蛋白Caspase-3、Bax、Bcl-2的荧光强度增大,这个结果和western blot相符合。结论:1.木榄叶乙醇提取物、石油醚提取物、乙酸乙酯提取物对胰腺癌细胞SW1990增殖均有明显抑制作用,正丁醇提取物抑制作用不明显;且木榄叶乙酸乙酯部位抑制胰腺癌SW1990增殖作用最明显,采用单细胞克隆也证明木榄叶乙酸乙酯部位对胰腺癌SW1990增殖具有明显抑制作用。2.木榄叶乙酸乙酯部位提取物可显著抑制胰腺癌SW1990的迁移和侵袭,其抑制增殖作用与时间及浓度呈正相关,提示木榄叶乙酸乙酯部位提取物具有确切的抗胰腺癌SW1990作用。3.木榄叶乙酸乙酯部位提取物抑制胰腺癌SW1990的作用可能与其上调Caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达,下调Bcl-2/Bax蛋白比值密切相关。