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目的体外建立经细胞因子诱导分化健康成人外周血而来的γδT细胞培养体系,研究不同浓度香菇多糖(0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml)对人γδT细胞体外增殖及表面标志表达的影响。方法在无菌条件下采集3份健康成人外周血,分离获得单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC),用唑来膦酸(Zol)和白介素-2(IL-2)体外扩增人γδT细胞。在培养第10天后,将γδT细胞分为6组,分别加入不同浓度香菇多糖(0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml),标记为空白组、LNT-I组、LNT-II组、LNT-III组、LNT-IV组、LNT-Ⅴ组。诱导培养72h后,进行以下的研究:(1)MTT法检测不同浓度香菇多糖对γδT细胞增殖率的影响;(2)流式细胞仪检测不同浓度香菇多糖对γδT细胞纯度及表面标志CD3、CD44、CD107a表达的影响。结果(1)于体外培养第10天,加入不同浓度的香菇多糖共培养72小时后,LNT-I组、LNT-II组、LNT-III组、LNT-IV组、LNT-Ⅴ组的增值率分别是:(23.35±1.69)%、(31.79±1.46)%、(4.58±1.11)%、(-9.22±1.70)%、(-13.65±2.98)%,实验组与对照组及各实验组间比较,差异有统计学意义(P<0.05),5、10、25μg/ml香菇多糖作用于γδT细胞72 h后对细胞增殖有明显的促进作用,而50、75μg/ml的香菇多糖则抑制γδT细胞的增殖,浓度为10μg/ml的香菇多糖对γδT细胞增值率影响最高,为最适促进细胞增长的药物浓度。LNT-IV组、LNT-Ⅴ组大部分γδT细胞已经死亡,设定LNT-III组为后续实验最终实验组。(2)γδT细胞与不同浓度香菇多糖共培养72小时后,(1)空白组、LNT-I组、LNT-II组、LNT-III组的γδT细胞表面标志Anti-TCR-γδ分别为(49.05±3.02)%、(50.33±4.81)%、(58.34±3.58)%、(69.90±4.55)%,其中,5μg/ml香菇多糖组细胞表面Anti-TCR-γδ的表达与空白对照组有差异,但差异无统计学意义(P>0.05),而10、25μg/ml实验组的细胞表面Anti-TCR-γδ表达高于空白组和5μg/ml香菇多糖组,差异有统计学意义(p<0.05)。(2)空白组、LNT-I组、LNT-II组、LNT-III组的γδT细胞表面标志CD3分别为(84.59±3.78)%、(93.38±2.32)%、(96.33±1.13)%、(94.58±2.59)%,各香菇多糖组γδT细胞表面CD3的表达均高于空白对照组,差异有统计学意义(p<0.05),但各实验组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。(3)空白组、LNTI组、LNT-II组、LNT-III组的γδT细胞表面标志CD44分别为(33.53±3.10)%、(44.78±2.48)%、(48.37±3.05)%、(54.68±3.20)%,各实验组γδT细胞表面CD44的表达明显优于对照组,差异有统计学意义(p<0.05),其中5、10μg/ml香菇多糖组细胞表面CD44的表达低于25μg/ml香菇多糖组,差异有统计学意义(P<0.05),而5和10 ug/ml香菇多糖组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(4)空白组、LNT-I组、LNT-II组、LNT-III组的γδT细胞表面标志CD107 a分别为(19.54±4.09)%、(19.45±3.28)%、(15.63±2.26)%、(13.31±2.25)%,各实验组间及实验组与空白对照组间CD107a的表达虽有差异,但差异无统计学意义(p>0.05)。结论(1)在一定浓度范围内,香菇多糖对γδT细胞的体外增殖有促进作用,然而高浓度香菇多糖反而会抑制细胞的增殖。香菇多糖诱导γδT细胞的最适浓度为10μg/ml。(2)10、25μg/ml香菇多糖可促进γδT细胞表面标志Anti-TCR-γδ的表达;香菇多糖可促进γδT细胞表面CD3的表达,但与香菇多糖浓度无关;香菇多糖可促进γδT细胞表面CD44的表达,以25μg/ml时效果更加显著;香菇多糖对γδT细胞表面CD107a的表达影响不明显。