奶牛临床乳房炎源大肠杆菌主要毒力基因的克隆与序列分析

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为了研究宁夏地区奶牛临床乳房炎大肠杆菌分离株血清型分布和主要毒力基因,采集2013-2014年宁夏地区临床乳房炎病牛奶样作为大肠杆菌检测的样品,进行分离培养,采用细菌生化试验进行鉴定。使用大肠杆菌0抗原诊断血清对分离自奶牛临床乳房炎的120株大肠杆菌分离株进行血清学检测,并利用PCR方法扩增定居因子基因fimH、f17、f165、f41、 f5、eae、cs31a和转运蛋白trat基因。采集2013-2014年宁夏地区临床乳房炎病牛奶样作为大肠杆菌检测的样品,进行分离培养,采用细菌生化试验进行行鉴定,120株鉴定为大肠杆菌。大肠杆菌O抗原鉴定结果:经鉴定120株奶牛临床乳房炎大肠杆菌分离株中有71株检测出血清型,鉴定出08,010,015,018,022,O 26,053,055,068,086,091,092,093,0101,0107,0117,0126,0142,0148,0153,0158共21种血清型。优势血清型为0158,0101,0126,091,015,026,0107,占定型株的61.9%,49株未鉴定出血清型。选择trat和7种定居因子fimH、f17、f165、f41、f5、eae、cs31a进行检测。实验结果显示,120株大肠杆菌PCR扩增结果为trat基因分离率为24.2%,fimH基因分离率为85.8%,f17基因分离率为5%,f165基因分离率为3.3%,f41基因分离率为0,f5基因分离率,0,eae基因分离率为0,cs31a基因分离率0。实验结果表明肠道内感染和临床乳房炎大肠杆菌分离株血清型、毒力基因分离率不同。本实验选取奶牛临床乳房炎大肠杆菌分离株(0158)为样品,设计并合成引物,对fimH基因进行克隆和序列测定.测序结果显示fimh基因在第714碱基位点位点由T突变为A,在第717个碱基位点位点由A突变为G,第807个碱基位点位点由G突变为A,第831个碱基位点位点由T突变为C。
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