【摘 要】
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猪流行性腹泻（Porcine Epidemic Diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Vrius,PEDV）引起的猪高度传染性疾病。其特征是急性腹泻、呕吐和严重脱水。该病毒可感染所有年龄段的猪,但该病在出生后7-10 d的新生仔猪中死亡率十分之高,死亡率可高达80%-100%。目前我国PEDV防控主要采用弱毒疫苗与灭活疫苗免疫方法,但其
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猪流行性腹泻（Porcine Epidemic Diarrhea,PED）是由猪流行性腹泻病毒（Porcine Epidemic Diarrhea Vrius,PEDV）引起的猪高度传染性疾病。其特征是急性腹泻、呕吐和严重脱水。该病毒可感染所有年龄段的猪,但该病在出生后7-10 d的新生仔猪中死亡率十分之高,死亡率可高达80%-100%。目前我国PEDV防控主要采用弱毒疫苗与灭活疫苗免疫方法,但其具有反毒现象明显,保护力较弱的缺陷,因此新型PEDV亚单位口服疫苗的研究亟待解决。本研究旨在通过大肠杆菌BL21表达系统表达猪流行性腹泻病毒S重组蛋白,并对其免疫学特性进行评价。首先,利用基因工程技术,比对后的我国常发毒株的PEDV S抗原表位基因组合后克隆至p ET32a（+）表达载体中,并将其转化至大肠杆菌中进行表达。通过SDS-PAGE和Western blot分析蛋白表达情况,并中量制备菌液,以不同剂量灌服至小鼠,同时进行弱毒疫苗与灭活疫苗对照,在0、7、14、21、35 d采集血清进行PEDV特异性抗体、免疫球蛋白、细胞因子的测定,同时对高剂量组小鼠的内脏进行病理切片以判断其内脏毒性,通过16s测序判断其对肠道菌群影响。大肠杆菌成功表达了PEDV S重组蛋白。对该蛋白进行了小鼠免疫学评价并与常用PEDV疫苗进行比较性研究结果表明,该重组蛋白具有良好的免疫原性,能够诱导小鼠产生强烈的免疫反应,且能够特异性地诱导PEDV分泌型Ig A产生。此外,对灌服表达重组蛋白的菌液小鼠的内脏与肠道进行HE切片染色和肠道菌群16s分析,结果表明未见试验组小鼠肝肾毒性且可显著提高肠道菌群的物种丰富度和均匀度。综上所述,通过大肠杆菌表达系统表达的PEDV S重组蛋白具有良好的免疫原性和抗原特异性,因此该重组蛋白具有成为PEDV口服疫苗候选物的潜力。
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