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第一部分五甲基槲皮素对正常人血小板的作用及其机制研究目的：研究五甲基槲皮素(Pentamethylquercetin, PMQ)对正常人血小板功能的影响,并探索其机制。方法：采用乳酸脱氢酶细胞毒性试剂盒检测五甲基槲皮素对人洗涤血小板的细胞毒性；采用血小板聚集仪检测五甲基槲皮素对不同诱导剂(ADP、胶原、凝血酶、U46619、肾上腺素和PDBu)诱导的血小板聚集的影响,及其对不同激动剂(胶原和凝血酶)诱导的ADP释放的作用；采用流式细胞术检测五甲基槲皮素对不同激动剂(胶原和凝血酶)诱导血小板激活时P-selectin的表达；采用免疫荧光法检测五甲基槲皮素对血小板在胶原上黏附功能的影响;采用Westernblot检测五甲基槲皮素对血小板的共同信号通路蛋白表达情况的影响；采用免疫荧光法检测五甲基槲皮素对血小板在固化纤维蛋白原上扩展功能的影响；检测五甲基槲皮素对血块回缩的影响;采用、Vestern blot检测五甲基槲皮素对血小板“由外向内”信号转导的影响。结果：①五甲基槲皮素对血小板无细胞毒性作用。②五甲基槲皮素可以抑制小剂量ADP和胶原诱导的人富血小板血浆(PRP)的聚集,延长小剂量肾上腺素诱导的人PRP到达最大聚集的时间,但是不能降低在肾上腺素刺激下血小板的最大聚集率,而对大剂量的各种激动剂致PRP聚集则无明显抑制作用。③五甲基槲皮素可以抑制胶原、凝血酶、U46619和PDBu (PKC激动剂)诱导的人洗涤血小板的聚集。④五甲基槲皮素可抑制胶原和凝血酶诱导的人血小板颗粒释放。⑤五甲基槲皮素可减少血小板在胶原上的黏附。⑥免疫印迹分析显示,五甲基槲皮素抑制被不同激动剂激活的血小板共同信号通路PI3K-Akt-GSK3β, MAPK-ERK1/2和Syk-PLCγ2。⑦五甲基槲皮素可减少血小板在固化纤维蛋白原上的扩展。⑧五甲基槲皮素可以减少血块回缩。⑨五甲基槲皮素可以抑制血小板活化的重要步骤—“由外向内”信号转导。结论：五甲基槲皮素可能通过抑制PI3K-Akt-GSK3β、MAPK-ERK1/2、 Syk-PLCy2通路,从而抑制血小板“由内向外”和“由外向内”信号转导,进而抑制血小板聚集、释放、黏附和扩展,发挥抗血小板作用。第二部分五甲基槲皮素在动物体内的抗栓作用目的：研究五甲基槲皮素对动物体内血栓形成的影响。方法：应用血小板聚集仪,检测在体给予五甲基槲皮素后,大鼠血小板聚集情况的变化；建立胶原+肾上腺素诱导的小鼠急性肺栓塞模型,分析五甲基槲皮素对急性肺栓塞小鼠存活率的影响及相应肺组织病理改变情况；建立氯化铁诱导的小鼠颈动脉血栓模型,检测五甲基槲皮素对血栓形成的影响；采用小鼠断尾出血模型,检测五甲基槲皮素对生理止血的影响。结果：①体内使用五甲基槲皮素可以抑制胶原和凝血酶诱导的血小板聚集。②胶原+肾上腺素诱导的小鼠急性肺栓塞模型显示：五甲基槲皮素可以显著降低小鼠死亡率；肺组织病理切片显示：五甲基槲皮素可减少微血管血栓形成。③氯化铁诱导的小鼠颈动脉血栓形成模型显示：五甲基槲皮素可以缓解氯化铁引起的颈动脉损伤后所引起的血流量下降。④小鼠断尾出血模型显示：五甲基槲皮素对生理性止血无影响。结论：五甲基槲皮素可抑制小鼠血栓形成。