‘晶瑶’草莓高效离体再生体系建立及抗病性诱导

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草莓(Fragaria ananassa Duch.)为蔷薇科(Rosaccae)草莓属(Fragaria)多年生草本植物,是世界上最重要的经济浆果之一。草莓栽培品种在遗传上高度杂合,杂交后代广泛分离,给杂交育种带来很大困难,而且常规育种费时费力,周期长,选择效率低,植物基因工程的发展和应用开辟了草莓分子育种新途径。防治草莓病害的传统方法是使用化学杀菌剂,化学杀菌剂的长期使用存在着农药残留、污染环境等诸多弊端。利用一些外界因子诱导植物产生抗病性,通过植物自身的防御系统来抵御病害,避免了化学农药残留等一系列问题,该类生物防治措施已逐渐应用到农作物病害防治中。建立一个稳定而高效的受体再生体系是草莓转基因研究的前提。因此,本研究以草莓品种‘晶瑶’为试材,研究了草莓离体再生过程中基本培养基、植物生长调节剂、暗培养、硝酸银浓度、接种方式、叶片不同部位以及叶龄等对草莓离体再生不定芽的影响,建立了草莓‘晶瑶’离体再生体系。另外,本研究也初步分析了草莓炭疽菌培养物对草莓诱导抗病性的影响,并测定了经不同诱导处理后草莓叶片的SOD、POD、CAT活性变化。主要研究结果如下:1.建立了草莓‘晶瑶’的离体再生体系(1)通过比较MS、MS+B5、B5三种基本培养基对‘晶瑶’叶片不定芽再生的影响后发现,MS为基本培养基时叶片不定芽再生率最高,与MS+B5和B5两种基本培养基相比差异显著。(2)通过比较不同植物生长调节剂组合处理对不定芽再生率及不定芽发生的质量情况的影响,获得草莓‘晶瑶’叶片、叶柄的最适不定芽再生培养基分别为:叶片:MS+TDZ2.0mg/L+2,4-D0.05mg/L,不定芽再生率达79.17%。叶柄:MS+TDZ3.0mg/L+2,4-D0.05mg/L,不定芽再生率达41.67%。(3)暗培养对草莓‘晶瑶’叶片不定芽再生有显著的促进效果。暗培养7d可将不定芽再生率由60.83%提高到85.83%。但随着暗培养时间延长,不定芽再生率下降。(4)培养基中添加不同浓度的AgNO3,不定芽的再生率显著下降,且随着AgNO3浓度的增大,对不定芽再生的抑制效应更加明显。(5)叶片不同部位对‘晶瑶’叶片不定芽再生具有一定影响,以叶基部作为外植体时其不定芽再生率显著高于叶顶端,但与叶中部相比差异不显著。叶片以近轴面向下或近轴面向上两种方式接种,不定芽再生率并无显著差异,但叶片以近轴面向下接触培养基再生效果略好。近心叶第二、三片叶再生能力最强,不定芽再生率显著高于近心第一、四、五片叶。2.发现炭疽菌培养物可诱导草莓‘晶瑶’对炭疽菌产生一定的诱导抗性。(1)草莓炭疽菌发酵培养获得菌丝体,菌丝体抽提物过滤灭菌(FSEM)后喷施处理‘晶瑶’组培苗,3d后接种草莓炭疽菌,发现FSEM处理草莓‘晶瑶’能提高其对炭疽病的抗性,发病率降低,推测其对草莓炭疽病具有一定的诱抗效果。(2)测定了‘晶瑶’经不同处理诱导和接种后,叶片中SOD、POD、CAT生理生化指标的变化,发现FSEM能够诱导‘晶瑶’叶片中SOD、POD、CAT活性提高,因此推测FSEM诱导草莓‘晶瑶’对炭疽病产生抗病性与植株体内防御酶活性变化密切相关。
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