【摘 要】
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目的了解ε-多聚赖氨酸对白色念珠菌的抑菌活性,以及对主要毒力菌丝、生物膜的影响,并进一步探究ε-多聚赖氨酸对白色念珠菌抑菌机制。方法参照CLISI-M27文件微量稀释法测定ε-多聚赖氨酸的最小抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MFC）和最低抑制生物膜浓度(SMIC50);微量比浊法绘制48h内的浮游菌株时间-生长曲线;结晶紫法测定ε-多聚赖氨酸对白色念珠菌生物膜形成过程以及成熟生物膜的影响,并绘制
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目的了解ε-多聚赖氨酸对白色念珠菌的抑菌活性,以及对主要毒力菌丝、生物膜的影响,并进一步探究ε-多聚赖氨酸对白色念珠菌抑菌机制。方法参照CLISI-M27文件微量稀释法测定ε-多聚赖氨酸的最小抑菌浓度（MIC）、最小杀菌浓度（MFC）和最低抑制生物膜浓度(SMIC50);微量比浊法绘制48h内的浮游菌株时间-生长曲线;结晶紫法测定ε-多聚赖氨酸对白色念珠菌生物膜形成过程以及成熟生物膜的影响,并绘制生物膜抑制-时间曲线;激光共聚焦显微镜观察ε-多聚赖氨酸干预白色念珠菌后生物膜形态;光学显微镜观测并记录4h内的芽管形成率和芽管长度,并拍摄白色念珠菌在含有不同浓度药物的诱导菌丝培养基中菌丝的形成情况;使用碘化丙啶染色法测定药物处理前后白色念珠菌细胞膜的损伤情况。荧光分光光度计测定ε-多聚赖氨酸处理前后白色念珠菌菌体内ROS活性氧含量;丙二醛（MDA）测定ε-多聚赖氨酸作用前后白色念珠菌细胞膜脂质氧化程度;紫外分光光度计测定白色念珠菌细胞内和线粒体内细胞色素C的含量变化;荧光PCR检测白色念珠菌氧化应激基因和主要毒力基因表达量的变化;飞行质谱仪检测白色念珠菌不同浓度药物作用前后蛋白谱的变化。结果ε-多聚赖氨酸对白色念珠MIC为512μg/mL,MFC为1024μg/m L,SMIC50为512μg/m L;ε-多聚赖氨酸对白色念珠菌浮游菌及生物膜抑制作用与药物浓度呈正相关,在生物膜形成早期即可以看到显著的抑制作用;ε-多聚赖氨酸对白色念珠菌生物膜形成过程和成熟生物膜均有显著的抑制作用;激光共聚焦实验结果表明ε-多聚赖氨酸可以抑制生物膜内的菌体增殖;高浓度的ε-多聚赖氨酸对白色念珠菌的芽管形成率、芽管长度具有明显抑制作用;ε-多聚赖氨酸作用于白色念珠菌细胞膜损伤程度随着药物浓度升高而升高。ε-多聚赖氨酸作用白色念珠菌后导致菌体内ROS活性氧累积、脂质氧化程度加剧,且与药物浓度呈现剂量依赖性;ε-多聚赖氨酸诱导白色念珠菌线粒体中的细胞色素C释放至细胞内;荧光PCR结果显示ε-多聚赖氨酸作用白色念珠菌诱导氧化应激基因高表达、毒力基因低表达;ε-多聚赖氨酸作用于白色念珠菌后菌体的质谱图中的主峰出现了明确的变化。结论ε-多聚赖氨酸在体外对白色念珠菌浮游菌株和生物膜均有显著的抑制作用,体外实验表明ε-多聚赖氨酸通过抑制菌丝形成、破坏生物膜结构以及损伤菌体的细胞膜等发挥抑菌作用;分子机制研究表明ε-多聚赖氨酸通过诱导ROS活性氧升高释放细胞色素C,攻击白色念珠菌细胞膜加剧其脂质氧化,同时抑制白色念珠菌相关毒力基因及蛋白的表达从而发挥抑菌作用。
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