生物被膜(Biofilm)是由微生物形成的被其自身分泌的胞外基质所包裹的一类群体,这种特殊结构能够抵御不良环境的影响,从而有助于微生物自身的生存。副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是一种常见的嗜盐性革兰氏阴性致病菌,是引起海鲜类食物中毒的主要原因,人感染后会引发急性肠胃炎、伤口感染和败血症等一系列疾病。副溶血弧菌形成生物被膜后,会增强其对不良环境的抗性,从而降低了抗生素的药效,增加了感染风险。辣木(Moringa oleifera)具有良好的抗菌活性,并被卫生部列为食品新资源,越来越受到食品研究领域的重视。因此,开发高效、安全、天然的抗生物被膜的物质具有重要的意义,而辣木就是良好的选择之一。本研究从广州市售海产品中分离鉴定副溶血弧菌,并对其耐药性和形成生物被膜的能力进行评估。从辣木叶中提取抗菌物质,筛选适宜的提取条件,分析其抑菌能力。通过结晶紫染色法、微量二倍肉汤稀释法、XTT比色法、荧光显微镜以及激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)等方法探究辣木叶提取物对副溶血弧菌分离菌株生物被膜的抑制和清除作用。具体研究内容及结果如下:广州市售海产品中副溶血弧菌的分离鉴定及其特性研究。采用国标GB4789.7—2013和16S rDNA测序比对法,从广州市售42份海产样品中分离鉴定出8株副溶血弧菌。分离菌株分布于各市区,主要来源于鱼和虾,分别有4株和3株,另外一株来源于蛤。考察了副溶血弧菌分离菌株对20种常见抗生素的耐药性,发现对多粘菌素B等8种抗生素均敏感,对青霉素、万古霉素2种抗生素均耐药,对其他10种抗生素有不同程度的耐药性。来源于鱼、虾中的菌株耐药性、多重耐药性均明显强于来源于蛤的菌株。分离菌株比ATCC 17802标准菌株的多重耐药性更显著。测定了分离菌株生物被膜形成能力,发现其与多重耐药性呈正相关。辣木叶抗菌物质的提取及抑菌作用的研究。利用超声辅助水提取法提取辣木叶中的抗菌物质,发现在料液比1:50、提取时间50 min、超声功率200 w、提取温度50℃的条件下提取的抗菌物质抑制副溶血弧菌标准菌株效果最好,抑菌圈达到24 mm,MIC为3.13 mg/mL。测定提取物中总多酚、总黄酮含量并分析其抗菌作用,发现对金黄色葡萄球菌等常见致病菌都具有很强的抑制能力,对保加利亚乳杆菌等乳酸菌以及真菌均无抑制效果。测定辣木叶水提物对分离菌株的最小抑菌浓度(MIC)为6.25mg/mL~12.5 mg/mL。辣木叶提取物对副溶血弧菌分离菌株生物被膜形成的抑制和清除作用。通过结晶紫染色法测定了分离菌株生物被膜被抑制和被清除的程度。结果表明,辣木叶提取物对分离菌株生物被膜形成、代谢活性具有较强的抑制作用,对成熟生物被膜亦具有清除作用。对不同菌株的抑制、清除效果有所差异。分析抑制和清除效果后,选取一株分离菌株进行后续的深入研究。利用荧光显微镜和激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察辣木叶提取物处理的副溶血弧菌分离菌株的生物被膜,结果表明:用辣木叶提取物处理的生物被膜中死细胞明显更多更密集,活细胞少且比较分散;添加不同浓度提取物处理的生物被膜,死活细胞的数量、分布也有差别。而且CLSM观察亦显示生物被膜上的胞外多糖明显减少,生物被膜厚度减小。两种显微镜的观察结果与上述抑制、清除率的测定结果具有一致性。揭示了辣木叶提取物通过抑制、杀死细菌以及破坏胞外多糖,从而对副溶血弧菌生物被膜具有抑制和清除作用。综上所述,辣木叶水提取物具有较好的抑菌作用,对副溶血弧菌生物被膜的形成具有抑制作用,且对其成熟生物被膜有一定的清除效果,具有重要的开发潜力及应用价值。