榛子叶中鞣质成分及其抗肿瘤作用的研究

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榛子叶为桦木科植物榛(Corylus heterophylla Fisch.)的叶,在我国进行栽培的历史悠久,分布广泛,资源丰富。对榛子叶中鞣质成分进行测定,并对其抗肿瘤作用进行研究,不仅有助于榛子叶资源的开发利用,同时对于开发天然的具有抗肿瘤作用的中药也具有重要意义。因此本文对榛子叶鞣质成分进行了如下的研究工作:提取分离榛子叶中鞣质类化合物并对其鉴别:采用已优化的超声提取法,用70%丙酮8倍量溶剂浸泡过夜,超声提取1h,功率160W,温度25℃,减压抽滤,弃去滤渣,回收丙酮。采用溶剂萃取法,依次用乙醚、乙酸乙酯、正丁醇按1:1比例萃取三次,回收有机试剂并干燥。对榛子叶鞣质进行含量测定:采用干酪素法和HPLC法。干酪素法测定鞣质含量:乙酸乙酯层浸膏中,总鞣质在浸膏中的含量为59.89%,正丁醇层浸膏中,总鞣质在浸膏中的含量为26.76%。HPLC法测定没食子酸含量:乙酸乙酯层提取物中的含量为4.91%,正丁醇层提取物中的含量为1.12%。对鞣质化合物的体外抗肿瘤活性进行研究:榛子叶不同提取层中鞣质对人肝癌细胞株HepG2和人胃癌细胞SGC-7901的作用。最终结果显示,在榛子叶中,乙酸乙酯层和正丁醇层鞣质均可抑制HepG2细胞和SGC-7901细胞的生长,并随着药物浓度的增大而增强。乙酸乙酯层对HepG2细胞的IC5o为129.46μg/ml,对SGC-7901细胞的IC50为137.30μg/ml。正丁醇层对HepG2细胞的IC5o为191.80μg/ml,对SGC-7901细胞的IC50为211.62μg/ml。在榛子叶中,乙酸乙酯层提取物的作用强于正丁醇层。对鞣质化合物的体内抗肿瘤活性进行研究:用榛子叶乙酸乙酯层和正丁醇层提取物对H22荷瘤小鼠进行体内实验。实验结果表明,与模型对照组相比,各给药组抑瘤率均有显著性差异(P<0.05),抑瘤作用表现良好,200mg/kg浓度的乙酸乙酯层提取物的抑瘤率是59.74%,浓度为250mg/kg的正丁醇层提取物抑瘤率为42.21%。各剂量组的乙酸乙酯层和正丁醇层提取物都在不同程度上对H22小鼠的胸腺指数和脾指数有提高作用,对荷瘤小鼠的胸腺及脾这两大免疫器官有很好的保护作用。榛子叶的乙酸乙酯层和正丁醇层提取物可以提高H22荷瘤小鼠体内超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活力,能够使脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量降低,表明榛子叶乙酸乙酯层和正丁醇层提取物能够使荷瘤小鼠抗氧化系统的功能提高,对脂质过氧化有抑制作用,对体内过剩的氧自由基有清除作用,这也可能是其体内抗肿瘤作用机理之一以上实验可以看出榛子叶鞣质无论是在体内还是在体外都具有一定的抗肿瘤活性,对寻求天然无毒性的抗肿瘤药物是有重大意义的。而对于榛子叶中鞣质成分的提取分离、含量测定以及抗肿瘤活性的研究,不仅能够为中药成分鞣质的药理研究作为实验基础,同时能够为进一步开发资源丰富的榛子叶的应用价值提供有力依据。
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