一株百菌清降解菌株的分离鉴定及其对土壤中百菌清污染的修复研究

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从江苏省新沂市丰乐化工有限公司长期受百菌清污染的土壤中分离、筛选到1株百菌清的高效降解菌株BJQ-3,根据其生理生化特性以及16S rRNA基因的系统发育分析,将该菌株鉴定为假单胞菌属(Pseudomonas sp.)。对菌株BJQ-3的生物学特性进行了研究,菌株BJQ-3的最适生长温度为30℃,最适pH值为7.0,NaCl浓度为1-3%,对葡萄糖、丁二酸钠和乙酸钠等碳源利用最好,对蛋白胨和酵母汁有机氮源利用最好,对硫酸铵无机氮源利用最好,菌株BJQ-3抗生素抗性谱较窄,对30mgL-1的氯霉素有抗性,而对50mgL-1的链霉素、壮观霉素和庆大霉素、30mgL-1的四环素、100mgL-1的卡那霉素和氨苄霉素无抗性。系统研究了菌株BJQ-3对百菌清的降解特性,菌株BJQ-3不能利用百菌清为唯一碳源生长,但以非共代谢方式高效降解百菌清。菌株BJQ-3可以在48h降解95.6%的50mgL-1的百菌清,在20-40℃条件下对百菌清都有降解效果,35℃时降解效果最好;最适降解的pH值为6.0-7.0,pH低于5.0的酸性条件下不利于降解,pH8.0-9.0的偏碱性条件下降解良好;添加可选择性的碳、氮源可以促进百菌清降解,但非降解所必需,与共代谢降解机制不同。通过紫外扫描和高效液相色谱(HPLC)图谱比对和脱氯实验验证等方法,将百菌清的降解产物鉴定为羟基百菌清(CTN-OH),表明菌株BJQ-3能将百菌清的的一个氯原子脱除生成羟基。采用454高通量测序技术,研究百菌清长期污染和菌株BJQ-3修复百菌清污染土壤对细菌群落结构影响。研究发现,长期受百菌清污染的土壤中,变形菌门Proteobacteri、放线菌门Actinobacteria、硬壁菌门Firmicutes细菌比例增加,而酸杆菌门Actinobacteria、芽单胞菌门Gemmatimonadetes、浮霉菌门Planctomycetes、拟杆菌门Bacteroidetes、硝化螺旋菌门Nitrospira、Candidate division WS3、疣微菌门Verrucomicrobia.氰基细菌门Cyanobacteria比例显著降低,绿弯菌门Chloroflexi细菌变化不显著。接种7.45±0.55×107CFU g-1菌株BJQ-3到人为添加浓度为50mgkg-1的百菌清土壤中,30d可将百菌清降解到检测不出的水平。通过对土壤中细菌群落多样性分析,发现50mgkg-1干土的百菌清的施加会对土壤细菌多样性造成显著影响,百菌清的污染导致硝化细菌、蓝细菌门的细菌数量下降,而百菌清耐受性细菌比例上升,添加BJQ-3可部分恢复百菌清对细菌群落的影响。
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