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背景神经母细胞瘤(Neuroblastom NB)是儿童最常见颅外实体肿瘤,是婴幼儿期最常见的肿瘤,是导致儿童因肿瘤死亡的第三个常见原因。NB起源于原始神经嵴细胞,可出现在有交感神经系统内的任何地方。大多数原发肿瘤出现在腹部并常常涉及到肾上腺,其发病高峰中位年龄约为17个月。NB预后较差,具有复杂的生物学行为和临床特性,除极少数可以自行消退外,绝大部分临床上表现为激进性和高转移性。尽管近年来诊疗技术取得了很大的进步,但是对恶性NB患儿仍然缺乏有效的治疗手段,同时还存在对低、中度恶性NB患儿过度治疗的难题。恶性NB患儿的5年生存率仅仅为40%。如何准确判断NB预后以指导临床治疗显得尤为重要。信号转导子和转录激活子-3(Signal transducer and activators of transcription3STAT3),是位于人类第17号染色体长臂上的基因,其产物介导细胞外信号转导和下游靶基因的转录。STAT3编码参与Jak-STAT信号通路、调控神经元轴突的生长、凋亡及免疫应答反应等多种信号通路的转录因子。STAT3激活后诱导多种与细胞增殖、分化、生存和凋亡密切关联的关键基因的表达,表现为促进细胞增殖、恶性转化、阻碍细胞凋亡等致癌作用。而STAT3在神经母细胞瘤中的表达国内外尚未见报道。缺氧诱导因子1α(Hypoxia inducible factor-1α HIF-1α),是一种核内转录蛋白,低氧情况下逃逸泛素化蛋白酶水解而组成性激活,HIF-1α可以在基因水平上直接调控VEGF的表达,而VEGF在肿瘤血管形成调控方面起着重要的作用,因此HIF-1α是恶性肿瘤诱导新生血管形成的一个主要调节因子。研究证实,在大多数人类肿瘤中存在HIF-1α的过表达,HIF-1α的活性在维持肿瘤细胞能量代谢、新血管生成、促进肿瘤增殖和转移中发挥重要作用。国内外对神经母细胞瘤中HIF-1α的研究多集中在细胞系体外实验的研究,而体外实验与体内环境是存在差异的。目的本研究通过SP酶联免疫组织化法和逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对STAT3、HIF-1α蛋白和mRNA在神经母细胞瘤及对照瘤旁组织中的表达情况进行定性和定量检测,以了解低氧环境下二者在神经母细胞瘤中抗凋亡增殖机制,以及二者在神经母细胞瘤发生、发展中的作用,为临床合理治疗NB提供判断依据。材料与方法1.收集郑州大学第三附属医院及郑州大学第一附属医院小儿普外科2010年7月至2012年2月术中速冻病理诊断为NB的新鲜无坏死手术标本40例,同时取距NB瘤组织5cm的瘤旁组织作为对照组。搜集整理患儿的一般情况,如性别、诊断年龄、临床分期、病理分型、是否发生淋巴结转移等临床资料,用于分析STAT3、HIF-1a与临床资料的相关性。2.采用SP酶联免疫组化法检测STAT3、HIF-1a蛋白表达情况。3.采用逆转录聚合酶联反应方法分别检测40例新鲜无坏死NB瘤组织及对照组NB瘤旁组织中STAT3、HIF-1a的mRNA的表达情况。4.统计学处理：数据处理应用SPSS17.0软件处理,STAT3、HIF-1α基因蛋白表达情况采用χ2检验；STAT3、HIF-1αmRNA的表达情况采用组间独立样本t检验；采用person相关性分析统计二者之间的相关性。检验水准α=0.05。结果1.转录因子STAT3、HIF-1α基因蛋白在NB瘤组织中表达明显增多,在对照组瘤旁组织中有微弱的表达,NB瘤组织中的表达量明显高于对照瘤旁对照组,其中STAT3为胞浆着色,HIF-1a为胞核着色。(见附图)2.NB瘤组织中,RT-PCR结果显示,STAT3mRNA在NB瘤FH(预后良好型,Favorable histology)组UFH(Unfavorablehistology)组及对照瘤旁组织中均有表达,NB瘤组织中的表达量高于对照的瘤旁组织,且UFH组表达量高于FH组均高于对照组,组间比较差异有统计学意义(F=22,p=0.001)。HIF-1a亦在NB瘤组织和对照瘤旁组织中均有表达,NB瘤组织中的表达量高于对照瘤旁组织,UFH组表达量高于FH组均高于对照组,差异有统计学意义(F=111.820,p=0.001)3.NB瘤组织中STAT3mRNA与HIF-1amRNA表达的相关性本实验的40例NB瘤组织中STAT3mRNA、HIF-1amRNA相对表达水平分别为0.530±0.051、0.489±0.032,两者表达呈正相关(r=0.485,p<0.001)结论1.STAT3在神经母细胞瘤中高表达预示NB预后较差。2.HIF-1a在神经母细胞瘤中过表达并促进NB的恶性表型发生,预示着较差的预后。3.STAT3与HIF-1a在促进神经母细胞瘤的发生、发展过程中有协同作用。