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研究背景和目的卵巢早衰(Premature ovarian failure, POF)是育龄期女性因性腺功能衰竭出现绝经以及性器官萎缩的综合征，多因卵泡的缺失或卵泡对促性腺激素反应低下而缺乏生育能力[1]。POF女性自然妊娠能力几乎为零，且对各种诱导排卵方案反应不良；她们不仅提前出现衰老症状，骨质疏松和冠心病风险也显著上升；该人群的死亡率高达普通人群的两倍，且该病无有效治疗措施。POF病因和发病机制迄今尚不清楚，染色体异常、自身免疫、代谢异常或药物作用、放射损害、病毒感染等因素可能与POF的发生有关[2,3]。研究表明，细胞免疫与卵巢早衰的发病机制密切相关，POF是一种T淋巴细胞调控改变导致的细胞免疫异常反应[4,5]。CD4+CD25+调节性T细胞(简称Treg)是一类具有抑制免疫反应的细胞，其数量和功能的改变涉及多种自身免疫性疾病，它能抑制CD4+T、CD8+T细胞的增殖，抑制IFN-γ的产生[6,7],维持机体的免疫耐受、避免自身免疫性疾病的发生，另外，Treg可分泌免疫下调性细胞因子TGF-β发挥免疫抑制功能，而TGF-β在体外又可以诱导人外周血Treg细胞增生及分化[8]。去除胸腺的新生小鼠[9]因缺乏成熟的Treg细胞在4-14周内发生了严重的炎性反应，包括POF,而提高或增强Treg的数量或功能可防止或抑制这些自身免疫性疾病的发生或发展[10],提示Treg细胞调控该病的作用。目前对于POF的T细胞研究有多种不同结果，由于其采用的方法及病例选择的差异，这些结果仍不能解释自身免疫性卵巢早衰的发病机制，另外，对Treg及其分泌的细胞因子在POF中的免疫调节作用的研究还鲜有报道，本文旨在探索T淋巴细胞亚群、Treg细胞及其相关的细胞因子在POF发生发展中的作用。研究方法1外周血CD4+T、CD8+T细胞的比例测定选取我院门诊就诊的26名卵巢早衰患者，19名卵巢储备功能下降(Diminished Ovarian Reserve，DOR)者，及26名健康育龄女性作为对照，抽取早卵泡期外周静脉血，流式细胞术定量检测CD4+T、CD8+T细胞的比例。2Treg细胞的比例测定选取我院门诊就诊的23名卵巢早衰患者，18名卵巢储备功能下降患者，及24名健康育龄女性作为对照，抽取早卵泡期外周静脉血，利用不同荧光标记的鼠抗人CD4、CD25、Foxp3单克隆抗体标记外周血淋巴细胞(PBMC)，流式细胞术定量检测Treg细胞。3Treg细胞增殖抑制功能的检测选取我院门诊就诊的16名卵巢早衰患者，及21名健康育龄女性作为对照，抽取早卵泡期外周静脉血，采用免疫磁珠细胞分选的方法分离外周血中Treg细胞细胞及CD4+CD25-T细胞，流式细胞仪检测Treg细胞纯度，3H-thymidine法测定其增殖抑制功能。4细胞因子IFN-γ,TGF-β1水平的测定从POF患者17例、卵巢储备功能减退(DOR)患者11例以及生殖中心健康育龄女性16例的外周血标本中分离血清，酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA)检测三组样本细胞因子IFN-γ,TGF-β的水平。以血清FSH与LH比值代表卵巢储备功能，分析卵巢早衰患者IFN-γ、TGF-β1的变化及与卵巢储备功能的关系。结果1外周血Treg细胞的定量检测POF患者、DOR患者外周血Treg细胞水平与健康对照组相比均明显降低(P＜0.01)；POF患者与DOR患者之间Treg水平无显著差异。2外周血CD4+T、CD8+T细胞的检测CD4+T细胞比例POF组及DOR组均较对照组相比降低(P＜0.05)，但POF组与DOR组组间比较无明显差别。CD8+T细胞比例POF组较对照组相比明显降低(P＜0.01)，POF组与DOR组、DOR组与对照组相比均无明显差异。CD4+T/CD8+T比值，POF组低于对照组(P＜0.05)，与DOR组相比无明显差异，DOR组与对照组相比亦无明显差异。3体外增殖抑制试验表明，POF患者Treg细胞平均增殖抑制率为(63.51±5.57)％，健康对照组为(66.64±7.45)％，两组比较无明显差异(P＞0.05)。4POF组和DOR组IFN-γ水平增高(P＜0.01)、TGF-β1水平降低(P＜0.01)， IFN-γ水平与FSH/LH比值呈显著正相关r=0.70(P＜0.01)。结论Treg细胞数量减少对CD4+T、CD8+T细胞的调控减弱，导致卵巢的免疫反应过度形成自身免疫性卵巢炎，可能是卵巢早衰的发病机制，Treg水平下降，其分泌的抑制性细胞因子TGF-β1随之减少，IFN-γ产生增多，可致卵泡发育障碍、卵泡过度闭锁，它们的共同作用促进了卵巢早衰的发生，另外，IFN-γ随卵巢储备功能下降而升高，与FSH/LH比值呈显著正相关，对评估卵巢储备功能，预测卵巢早衰具有参考价值。本研究为阐明POF发病机制以及从免疫调节的角度治疗疾病提供了新思路，也为下一步用体外扩增的抗原特异性Treg细胞治疗卵巢早衰提供了理论基础。