棉铃虫Helicoverpa armigera (Hubner)是一种世界性的重要经济害虫,其发生和危害严重影响到棉花的产量和质量。由于长期采用化学防治,棉铃虫对多种化学药剂尤其是拟除虫菊酯类杀虫剂产生了严重的抗性。细胞色素P450基因的过量表达导致解毒代谢增强是棉铃虫对拟除虫菊酯产生抗性的主要机理。属于CYP9和CYP6家族的多个P450基因的过量表达已被证实与棉铃虫对杀虫剂的解毒代谢有关。本文对棉铃虫P450基因CYP9A12, CYP9A17v2的5’-调控区进行了扩增,并采用报告基因技术对CYP9A17v2核心启动子区进行了缺失分析,以期找出其过量表达的调控机理,同时对CYP9家族基因(CYP9A12, CYP9A14, CYP9A17v2)和CYP6家族基因(CYP6B7)的编码区cDNA多态性进行了分析。1.棉铃虫细胞色素P450基因CYP9A12和CYP9A17v2 5’-调控区克隆和序列分析细胞色素P450基因CYP9A12和CYP9A17v2的过量表达和棉铃虫对拟除虫菊酯类杀虫剂抗性相关。以YG和YGF品系基因组DNA为模板,经PCR扩增和测序,获得CYP9A12 5 ’-调控区序列约2.6kb, CYP9A17v2 5’-调控区序列约3.4kb。通过BDGP在线分析软件预测出各基因的转录起始位点,并利用日本京都大学KEGG序列数据库MOTIF检索分析服务系统预测出上游启动子区域内两个基因的转录因子结合位点。通过对棉铃虫抗性和对照品系中这两个基因5’-调控区的克隆和序列分析,为下一步研究棉铃虫P450基因表达调控机制奠定了重要基础。2.棉铃虫细胞色素P450基因CYP9A17v2核心启动子区缺失分析CYP9A17v2的过量表达与棉铃虫对拟除虫菊酯类杀虫剂的抗性相关。为了研究CYP9A17v2表达调控机制,对CYP9A17v2核心启动子区域的功能进行了分析。构建了含荧光素酶报告基因(1uc)和CYP9A17v2启动子不同长度缺失片段(-1095-+43)的重组质粒,转染sf9细胞瞬时表达后用双荧光素酶报告基因检测系统检测启动子活性。功能分析的结果表明：所有构建的7个缺失片段均具有启动子活性,-197-+43启动子区域的转录活性最高。在CYP9A17v2基因5’-调控区-19～-113区域内可能存在转录增强因子的结合位点,而在-1095～-197区域内可能存在转录抑制因子的结合位点。本研究为探索棉铃虫CYP9A17v2过量表达的转录调控机理奠定了重要基础。3.棉铃虫拟除虫菊酯抗性相关细胞色素P450基因多态性分析CYP9家族基因(CYP9A12、CYP9A14、CYP9A17v2)和CYP6家族基因(CYP6B7)均与棉铃虫对拟除虫菊酯类杀虫剂抗性相关。本研究对棉铃虫拟除虫菊酯抗性品系YGF、抗性对照品系YG、敏感品系SCD、田间品系GY中这四个基因的全长cDNA序列进行了克隆和比较。其开放阅读框均存在单核苷酸多态性位点,导致多个位点的氨基酸替换,在P450较为保守的血红素结合区和螺旋K保守区等区域也发现存在氨基酸替换。研究还发现了一些抗性品系中特有的氨基酸替换。通过检测分析这4个基因在不同品系间的氨基酸多态性位点,筛选出比较有意义的位点,为下一步进行抗性相关的功能表达研究奠定基础。