1997年Dolly羊的诞生，被认为是哺乳动物克隆技术的里程碑。随着克隆技术的不断发展创新，近些年来又有多种哺乳动物被成功克隆，但这项技术仍然存在诸多问题，如克隆效率低下，畸形胎儿的比例大等等，这些问题的原因至今还没有彻底研究清楚，但是现在被普遍接受的造成克隆效率低下的主要原因就是由于核移植过程中卵母细胞对供核体细胞的细胞核不完全或异常重编程造成的，H1foo，仅存在于卵母细胞成熟过程的部分时期以及早期胚胎中，研究显示它可能参与了卵母细胞对供体细胞核的重新编程，并且抑制ES细胞的分化。本研究基于早前对于H1foo基因的研究积累，对其进行更为深入的研究。我们选取牛卵母细胞作为试验材料，首先对培养箱外牛卵母细胞的成熟情况进行了研究，旨在为后续试验提供可靠保证，然后进一步研究H1foo对牛卵母细胞的成熟影响，并利用活细胞实时成像技术观测对比了H1foo嵌入核移植供体核胚和牛受精卵雄原核的过程，取得如下试验结果：1、借助恒温热板和保温避光罩作为支持，构建培养箱外的培养系统，牛卵母细胞的成熟以第一极体的排出作为参照，对该系统与标准二氧化碳培养箱的牛卵母细胞体外成熟培养效果进行了对比试验，目的在于建立牛卵母细胞的培养箱外成熟培养体系，为牛卵母细胞的显微镜下实时观察创造条件。结果表明，培养箱外系统的卵母细胞的第一极体排出率与培养箱内培养组的排出率差异不明显。此后，通过活细胞成像技术对培养箱外的卵母细胞进行实时监测发现，卵母细胞在培养至18～20h时，卵母细胞胞质会有一个突然膨大而后又逐渐回缩的过程。通过试验我们证实了这种膨大现象与水通道蛋白AQP3的功能有关。2、通过定点突变技术构建了牛H1foo基因的突变体，在其氨基酸序列不变的情况下突变其特定位置的核苷酸序列，以使得突变序列能够逃逸特定siRNA的干扰。将野生型/突变型H1foo和体细胞型H1e的mRNA以及干扰H1foo表达的特异siRNA片段以不同组合注射到GV期的牛卵母细胞中，研究结果表明，H1foo对牛卵母细胞的成熟有显著的促进作用，而体细胞型H1e则没有此功能。3、利用体细胞核移植以及单精子注射为依托，以牛卵母细胞为试验材料，对H1foo嵌入牛受精卵精核与嵌入核移植胚供核的两个过程进行对比。首先原代分离胎牛皮肤成纤维细胞，并传代培养，以超量表达H1foo（显微注射H1foo-Venus的mRNA）的卵母细胞为受体，以染核的胎牛成纤维细胞为供核细胞进行核移植，另外以解冻的牛精子为供体进行ICSI。分别观察其绿色荧光的变化情况，结果表明，ICSI后25min时在受精卵雄原核上出现荧光标记的H1foo，75min时达到峰值，而核移植电融合后50min才可以隐约看到H1foo的出现，到100min时才明显发现其在供体细胞核上的积累，在200min时达到峰值。也就是说ICSI后H1foo嵌入到雄原核的速度明显快于其嵌入核移植供体核中的过程。