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目的:本研究通过采用单侧颈动脉硅胶管包裹联合高脂饲料喂养[16]的方法,建立新西兰兔动脉粥样硬化(Atherosclerosis AS)早期模型并进行药物干预,通过观察新西兰兔AS早期颈动脉形态、血脂变化、颈动脉外膜与滋养血管(Vasa Vasorum VV)新生相关因子和炎症因子的表达等,以深入探讨“金三角”方案(ATS方案[17])即阿托伐他汀+通心络+阿司匹林联合应用对新西兰兔AS早期模型及管壁VV新生相关炎症机制的干预作用,为中西医结合防治AS早期病变提供新思路,开辟新途径。方法:1“金三角”方案对新西兰兔动脉粥样硬化早期模型的干预作用将90只健康雌雄各半新西兰白兔适应性喂养2周后,随机地分为:对照组;模型组;通心络组(TXL);阿托伐他汀组(ATO);阿司匹林组(ASP);“金三角”组(ATS);每组15只,对照组给予普通饲料,模型组及各用药组动物均实施单侧颈动脉硅胶管包裹术复合高脂饲料喂养。根据人与动物用药量体表面积计算法及有关文献报道:临灌胃时用0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液将通心络超微粉、阿托伐他汀和阿司匹林配成相应浓度的混悬液,体积均为3ml·Kg-1,其中TXL组以通心络超微粉混悬液0.3g·Kg-1·d-1灌胃;ATO组予阿托伐他汀混悬液2.5mg·Kg-1·d-1灌胃;ASP组给予阿司匹林混悬液12mg·Kg-1·d-1灌胃;ATS组给予通心络超微粉混悬液0.3g·Kg-1·d-1加阿托伐他汀混悬液2.5mg·Kg-1·d-1加阿司匹林混悬液12mg·Kg-1·d-1灌胃,对照组和模型组给予等体积的0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液灌胃,连续喂养4周后取材,HE染色后利用光镜观察包管处颈动脉病理形态变化;生化法检测血清TC、TG、LDL-C水平;彩色微球检测AS早期颈动脉血流灌注情况。2“金三角”方案对新西兰兔动脉粥样硬化早期颈动脉外膜滋养血管新生的干预作用在成功建立AS早期模型的基础上,进一步探讨“ATS”方案对颈动脉外膜上与VV新生相关因子表达的影响,实验造模、分组、给药及取材方法同第一部分。于实验末,免疫组化法检测颈动脉外膜CD34表达情况;RT-PCR、Western blot检测颈动脉组织血管生长因子及其受体(VEGF、VEGFR-2)的表达情况;ELISA法检测血管外膜内皮抑素(Endostatin ES)的表达水平。3“金三角”方案对新西兰兔动脉粥样硬化早期颈动脉外膜炎症机制的干预作用本部分是在前两部分实验的基础上,对ATS方案干预AS早期颈动脉外膜上与血管新生相关炎症因子及与颈动脉外膜VV新生相关炎症机制涉及分子信号转导通路的作用进行更深层次的观察。实验造模、分组、给药及取材方法同第一部分,实验末,RT-PCR检测颈动脉组织单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-8(IL-8)、NF-κB的表达情况;ELISA法测定各组颈动脉包裹段外膜白介素-6(IL-6)表达水平,免疫组化法检测血管外膜MCP-1、IL-8、NF-κB表达情况,Western blot检颈动脉组织NF-κB的表达水平。结果:1“金三角”方案对新西兰兔动脉粥样硬化早期模型的干预作用1.1各组颈动脉形态观察1.1.1颈动脉HE染色结果对照组:内皮细胞完整,胞核扁平,与内弹力板贴合紧密。中层平滑肌细胞排列整齐;模型组:内膜层不完整,内皮细胞部分脱落,内膜层明显增厚,可见少量泡沫状巨噬细胞形成;各用药组内膜层部分增厚,但较模型组程度减轻,以ATO组、TXL组及ATS组改善明显。1.2各组血脂变化与对照组比较,模型组血清中TC、TG、LDL-C表达水平显著升高(P<0.01),除阿司匹林组外,与模型组比较,各用药组血清TC、TG、LDL-C表达水平降低(P<0.01,P<0.05);ATS组与TXL组、ATO组、ASP组比较,血清TC、TG、LDL-C表达水平降低(P<0.01),其余各用药组间比较无统计学意义(P>0.05)。1.3彩色微球检测AS早期微血管灌注情况与对照组比较,模型组颈动脉微血管血流量增加(P<0.01);其余各用药组较模型组颈动脉微血管血流量减少(P<0.01);与其他各用药组比较,ATS组微血管血流量明显减少(P<0.01);ATO组与ASP组比较微血管血流量减少(P<0.05),TXL组、ASP组组间比较统计学差异无显著性(P>0.05)。2“金三角”方案对新西兰兔动脉粥样硬化早期颈动脉外膜滋养血管新生的干预作用2.1各组颈动脉外膜CD34表达水平与对照组比较,模型组CD34在颈动脉外膜新生VV处表达增多;与模型组比较,各用药组颈动脉外膜上CD34表达减少。2.2各组颈动脉组织VEGF、VEGFR-2基因和蛋白表达水平与对照组比较,模型组VEGFm RNA、VEGFR-2m RNA表达明显升高,(P<0.01);与模型组比较,各用药组VEGFm RNA、VEGFR-2m RNA表达均明显降低(P<0.01,P<0.05);与其他用药组比较,ATS组VEGFmRNA、VEGFR-2m RNA表达降低(P<0.01),TXL组、ATO组及ASP组组间比较统计学差异无显著性(P>0.05)。与对照组比较,模型组VEGF、VEGFR-2蛋白表达明显升高,(P<0.01);与模型组比较,各用药组VEGF、VEGFR-2蛋白表达均明显降低(P<0.01,P<0.05);ATS组VEGF、VEGFR-2蛋白表达低于TXL组、ATO组及ASP组(P<0.01,P<0.05);与ASP组比较,TXL组、ATO组VEGFR-2蛋白表达均明显降低(P<0.05),TXL组、ATO组组间比较统计学差异无显著性(P>0.05)。2.3各组颈动脉外膜组织ES的表达水平与对照组比较,模型组ES表达明显减少(P<0.01);与模型组比较,各用药组ES表达明显增多(P<0.01);与其他各用药组比较,ATS组ES表达增多(P<0.01);与ASP组比较,TXL组、ATO组ES表达增多(P<0.01),TXL组、ATO组组间比较统计学差异无显著性(P>0.05)。3“金三角”方案对新西兰兔动脉粥样硬化早期颈动脉外膜炎症机制的干预作用3.1各组颈动脉组织MCP-1m RNA、IL-8m RNA、IL-6的表达水平与对照组比较,模型组MCP-1m RNA、IL-8m RNA、IL-6表达明显升高(P<0.01);各用药组与模型组比较,MCP-1m RNA、IL-8m RNA、IL-6表达降低(P<0.01,P<0.05);ATS组与其他用药组分别比较,MCP-1m RNA、IL-8m RNA、IL-6表达降低(P<0.01);其他各用药组之间两两比较统计学差异无显著性(P>0.05)。3.2各组颈动脉外膜MCP-1、IL-8、NF-κB的表达水平与对照组比较,模型组MCP-1、IL-8、NF-κB在血管外膜VV处表达增多;与模型组比较,各用药组颈动脉外膜上MCP-1、IL-8、NF-κB表达减少。3.3各组颈动脉核NF-κB基因和蛋白的表达水平与对照组比较,模型组NF-κB基因和蛋白表达明显升高(P<0.01);与模型组比较,TXL、ATO、ASP、ATS组NF-κB基因和蛋白表达明显降低(P<0.01);ATS组NF-κB基因和蛋白表达均低于其他用药组(P<0.01,P<0.05),其余组间比较统计学差异无显著性(P>0.05)。结论:本研究采用单侧颈动脉硅胶管包裹联合高脂饲料喂养建立AS早期模型,同时给予药物干预,证实“ATS”方案能够降脂、减轻AS程度,减少管壁微血管灌注量,降低促血管新生因子CD34、VEGF、VEGFR-2的表达,增加抑血管新生因子内皮抑素(ES)表达,从而间接表明该方案能够减少颈动脉外膜新生VV数量,延缓AS进程,其疗效优于三药单用,其机制与减少MCP-1、IL-6、IL-8等血管外膜炎症因子表达,抑制血管外膜炎症有关,而对NF-κB信号通路的影响可能是其抑制血管外膜炎症反应的重要上游分子机制之一。