【摘 要】
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尿微量白蛋白(MA)作为糖尿病、肾病、心血管疾病等慢性病的早期诊断指标,对其定量检测有广泛的临床意义。因此,建立特异、灵敏的检测尿微量白蛋白的方法具有重要意义。本研究
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尿微量白蛋白(MA)作为糖尿病、肾病、心血管疾病等慢性病的早期诊断指标,对其定量检测有广泛的临床意义。因此,建立特异、灵敏的检测尿微量白蛋白的方法具有重要意义。本研究利用人血清白蛋白(HSA)制备抗HSA的兔多抗和小鼠单抗,并初步建立了基于尿微量白蛋白的双抗体夹心免疫荧光及ELISA检测方法。采用HSA免疫大耳白兔制备免疫兔血清,并采用蛋白A亲和层析柱纯化,获得高纯度的兔多抗,效价测定达到1×10~6;同时用HSA免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经克隆和间接ELISA筛选,筛选到六株能分泌抗HSA单克隆抗体的杂交瘤细胞株,其中三株效价高的杂交瘤株3F4、6F2和8B5制备腹水,经过鉴定:三株单抗都识别同一抗原表位,且3F4的单抗亚类是IgG2b(k型);采用蛋白G亲和层析柱纯化腹水,测定效价均达到1×10~7。以兔多抗和鼠单抗为基础,初步建立了尿微量白蛋白的双抗体夹心免疫荧光检测方法和ELISA检测方法。免疫荧光与ELISA法的线性范围范围分别为:50～1000ng/ml、10～400ng/ml。经敏感性实验、特异性实验、重复性实验,结果表明,该两种方法具有特异性好、灵敏度高和重复性好的特点,为建立科学完善的尿微量白蛋白检测方法提供基础。
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