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白细胞介素-8（IL-8）是一种CXC型趋化因子，它与鱼类的先天性免疫关系密切。本研究采用同源克隆和RACE技术克隆了淇河鲫（Carassius auratus in Qihe river）IL-8的cDNA全序列，并通过构建pET-32a(+)重组载体制备了具有免疫原性的IL-8蛋白，然后免疫动物获得了兔抗淇河鲫IL-8多克隆抗体。另外，利用实时荧光定量PCR技术，检测IL-8基因在健康淇河鲫不同组织的表达规律，并经腹腔注射LPS后0h、4h、8h、12h、1d、3d、7d，检测肌肉、脾脏、头肾、肠4个组织中IL-8基因的相对表达量。1.淇河鲫IL-8的基因克隆及序列分析淇河鲫IL-8cDNA序列全长为641bp，其中5′非编码区102bp、3′非编码区242bp和开放阅读框297bp，共编码98个氨基酸。肽链结构中含有4个保守的半胱氨酸，前两个半胱氨酸之间被一个精氨酸隔开；第一个半胱氨酸前缺乏经典的ELR（谷氨酸-亮氨酸-精氨酸）结构；预测的空间结构含1个α螺旋和3个β折叠；淇河鲫IL-8与鲤鱼、鳙鱼、草鱼、鲢鱼等鲤科鱼类的氨基酸同源性较高。2.淇河鲫IL-8基因的组成型和诱导性表达定量PCR检测发现，淇河鲫IL-8基因在头肾、肌肉、脾脏、肝胰脏、肠、鳃、心脏、脑8个组织都有表达，肌肉中表达量最高，其次为脾脏、头肾和脑等。腹腔注射LPS对肌肉、脾脏、头肾和肠道IL-8表达均有上调作用。肌肉IL-8表达量在注射后3d达到最高；脾脏IL-8表达量在4h时即达到较高水平，之后趋于稳定；肾IL-8在注射后4h即达到最大值，之后逐渐下降，3d后表达量趋于稳定；肠IL-8表达量随时间点呈现先升后降的趋势，12h达到最大值。生理盐水也可上调被检的4种组织IL-8的表达。3.淇河鲫IL-8的原核表达及多克隆抗体的制备选取淇河鲫IL-8不含信号肽的编码序列，引入EcoR I和Hind III限制性酶切位点，构建了pET-32a(+)-IL-8重组表达载体，在大肠杆菌Rosetta中进行了原核表达，经IPTG诱导后，获得了IL-8重组蛋白。诱导工程菌产生大量的重组IL-8蛋白并加以纯化，采用皮下多点注射的方法免疫新西兰大白兔，获得淇河鲫IL-8的抗血清，ELISA检测效价为1:100000。