金橙G和曙红B与DNA作用的共振光散射光谱研究与应用

来源 :山西农业大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:qijich
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本文在查阅大量文献的基础上,结合本实验室的条件,选用未报道过的新试剂作为DNA共振光散射探针,考察了金橙G、曙红B两种生物染色剂分别与DNA相互作用的共振光散射光谱,并根据DNA的加入浓度与共振光散射信号的改变值呈线性相关的特点,建立了两种灵敏的测定痕量DNA的新方法。这些方法简便、快速,检出限低,用于实际样品的测定,结果满意。同时结合吸收光谱法对这两种生物染色剂与DNA作用的机理做了初步的探讨。本文分为三部分:1.概述了本课题研究背景、核酸定量分析的研究进展、共振光散射技术在核酸分析中的应用情况及本论文的特点和意义。2.研究了生物染色剂金橙G(OG)与DNA相互作用的共振光散射光谱(RLS)。发现在中性环境下,DNA的加入可增强OG的RLS强度,在358nm处有增强的共振光散射特征峰,且在一定条件下,其增强程度与DNA的浓度呈线性关系,基于此建立了一种测定DNA的新方法。考察了体系的最佳反应条件和共存物质的影响。该方法的线性范围为0.053~1.20μg·mL-1,检出限为0.0159μg·mL-1,其线性回归方程为△Ⅰ=473.23c,相关系数为R2=0.9984。将该法应用于实际样品大豆叶片和黄芪叶片中DNA的测定,加标回收率在97.7%~103.0%之间,效果较为理想。3.研究了DNA对曙红B (Eosin B, EB)共振光散射光谱(RLS)的影响。实验发现,在弱酸性条件下(pH=3.4),小分子物质曙红B可以嵌插到DNA的双螺旋结构中,从而增强其RLS强度,在602nm处有增强的共振光散射特征峰,基于RLS的增强程度与DNA加入量的线性关系,建立了测定DNA的新方法。考察了体系的最佳反应条件和共存物质的影响。该方法的线性范围为0.039~14.0μg·mL-1,检出限为0.0118μg·mL-1,其线性回归方程为△I=64.334c,相关系数为R2=0.9979。应用于实际样品DNA的测定,加标回收率在98.5%~102.2%范围内,结果满意。
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