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目的:口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是头颈部最常见的恶性肿瘤。尽管目前已有许多先进治疗方法,OSCC患者的5年生存率仍停滞在40-50%左右。肿瘤高表达受体可作为肿瘤诊断和治疗的靶点,研究表明,胃泌素释放肽受体在多种肿瘤表面高表达,包括头颈部鳞癌。因此,本研究的目的是:1.制备OSCC靶向探针NGO-ant BBN-AF750和DOX@NGO-ant BBN-AF7502.体外研究上述分子探针用于OSCC诊疗一体化的可行性。方法:1.采用免疫组织荧光探究ant BBN对OSCC组织中GRPR的靶向结合。2.使用紫外分光光度计分析NGO对荧光淬灭的影响,确定最佳NGO浓度。通过氢键和π-π键偶联纳米氧化石墨烯(NGO)和ant BBN-AF750。通过傅里叶红外光谱、TEM、DLS及紫外分光光度计对分子探针进行表征。3.选用GRPR高表达的口腔鳞状细胞癌HSC-3细胞株进行体外实验。使用流式细胞仪、激光共聚焦显微镜进行细胞结合,摄取及内化实验。4.用不同pH模拟肿瘤微环境研究抗肿瘤药物DOX在不同pH条件下从DOX@NGO-ant BBN-AF750复合物释放情况;并进行了DOX@NGO-ant BBN-AF750细胞内化实验;通过CCK8测定不同游离DOX对HSC-3细胞增殖的影响,prism 6计算其半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50)。并进一步测定NGO-ant BBN-AF750、DOX@NGO-ant BBN-AF750、游离DOX对HSC-3细胞的毒性。结果:1.免疫组织荧光显示,在正常口腔黏膜组织中GRPR低表达,OSCC组织中高表达。2.傅里叶红外光谱、紫外分光光度计、TEM显示成功制备NGO-ant BBN-AF750、DOX@NGO-ant BBN-AF750,且为褐色粉末。荧光淬灭及恢复实验表明:NGO浓度为0.1mg/ml时近红外荧光信号被完全淬灭,且NGO-ant BBN-AF750遇到目标分子GRPR后可从探针脱落,起到靶向作用。3.细胞结合显示:uptake组HSC-3细胞与ant BBN-AF750共孵育后,显示出较强的近红外荧光信号,而blocking组HSC-3细胞与ant BBN-AF750共孵育10min后,未观察到荧光信号。细胞摄取及内化实验显示:HSC-3对探针的摄取具有时间依赖性,随着培养时间的增加,细胞摄取增加,在最初15min,我们观察到高达80%的快速结合,15min后荧光强度随时间变化不大。30min和60min时,细胞摄取率分别为83±15%和89±29%(ant BBN-AF750)和85±15%和96±20%(NGO-ant BBN-AF750)。Ant BBN-AF750组在HSC-3细胞膜上观察到荧光信号,而NGO-ant BBN-AF750组荧光信号与HSC-3细胞的细胞核荧光信号重叠,提示NGO-ant BBN-AF750可内化进入细胞。HOK细胞不表达GRPR,未观察到红色荧光信号。4.不同pH响应释放研究表明:在pH=5.6时,药物释放速率比其他两个(pH=6.6,7.4)快。并且在最初的9小时内,DOX的释放速度较快。36h后,药物释放速率趋于平稳。我们观察到,在pH值为5.6、6.6和7.4的情况下,在24h时PBS溶液中药物的累积释放量分别约为19.8%,17.7%和15.3%.CCK8实验显示:随着DOX浓度的增加,HSC-3细胞的活性降低,IC50值为5ug/ml(prism 6)。且在研究浓度范围内,NGO没有细胞毒性。对于游离DOX和DOX@NGO-ant BBN-AF750组,其对HSC-3细胞的毒性随着剂量的增加而增强。在相同的DOX浓度下,DOX@NGO-ant BBN-AF750组的细胞活力有所提高(5,10,20ug/ml),随着培养基pH值的降低,NGO-ant BBN-AF750组的细胞活力也随之降低。结论:1.本研究成功合成荧光靶向探针NGO-ant BBN-AF750和DOX@NGO-ant BBN-AF750。2.体外细胞摄取、结合及内化实验证实NGO-ant BBN-AF750靶向口腔鳞状细胞癌GRPR,可适用OSSS荧光显像.。3.体外pH响应、细胞内化及增殖实验证实DOX@NGO-ant BBN-AF750对体外HSC-3具有抑制作用。