论文部分内容阅读
肿瘤转移是恶性肿瘤治疗失败和患者死亡的主要原因,涉及一系列极其复杂的相互作用过程。首先,肿瘤细胞必须脱离原发灶,粘附在细胞外基质上,然后降解基质后进行转移。肿瘤细胞间粘附的丧失是肿瘤浸润转移的第一步,也是关键的一步[1]。近年来,β-catenin因其所扮演的双重角色(参与细胞粘附及参与Wnt信号转导)而得到了关注,在实际临床中,妇科肿瘤中卵巢癌又尤其以易复发易转移而难以治疗。故为了探明卵巢癌复发转移的机制,提高患者的5年生存率,迫切需要为其治疗寻找新的靶点。本实验首先探讨了β-catenin在卵巢肿瘤形成和转化中的表达特点及其与卵巢癌的临床病理学参数的关系,接着从β-catenin在人卵巢浆液性囊腺癌高低转移细胞株HO-8910PM及HO-8910中的表达情况探讨其与卵巢癌侵袭转移的关系,并且研究了β-catenin在常用化疗药物表阿霉素作用过程中的变化。以期待为进一步的临床研究提供一定的实验室依据。一、β-catenin在卵巢肿瘤中的表达所有标本来自第四军医大学西京医院妇产科及病理科2000～2007年存档的石蜡包埋标本,经临床、组织病理学和免疫组化结果证实诊断。根据存档的HE切片,选择无坏死、无大量出血、无色素的蜡块进行连续切片。选取临床病理资料完整者166例,所选病人的平均年龄约56.4岁,手术前未接受过化疗、放疗或免疫治疗。采用免疫组织化学SP染色法检测126例卵巢癌、20例卵巢交界性瘤、10例卵巢良性肿瘤和10例正常卵巢组织中β-catenin的表达,采用SPSS12.0软件的卡方检验统计方法进行分析。1.β-cat在卵巢癌组织、卵巢交界性肿瘤组织、卵巢良性肿瘤组织及正常卵巢组织的细胞胞膜及胞质中均表达,但β-cat在卵巢癌组织中表达与在卵巢良性肿瘤组织及正常卵巢组织中表达比较,差异有显著性(P<0.01)。2.β-cat表达与临床分期呈负相关性,从Ⅰ期到Ⅳ期,β-cat阳性表达率降低,临床分期Ⅰ期的卵巢癌β-cat阳性表达率为87.5%,临床分期Ⅳ期的卵巢癌β-cat阳性表达率为73.3%,两者比较差异有显著性(P<0.05)。二、人卵巢浆液性囊腺癌侵袭转移与β-catenin相关性的实验研究选用第四军医大学实验室保存的人卵巢浆液性囊腺癌高低转移细胞株HO-8910PM及HO-8910细胞,运用免疫荧光法,WesternBlotting以及RT-PCR检测细胞中β-catenin表达水平,MTT法、Transwell小室法检测细胞侵袭能力、迁移能力及粘附能力。1.Westernblotting检测β-cat(128KD)在HO-8910细胞中高表达,而在HO-8910PM中低表达。2.RT-PCR检测β-cat(298bp)在HO-8910细胞中高表达,而在HO-8910PM测得极少量表达。3.β-cat在低转移的HO-8910细胞中高表达,仅位于细胞膜上,呈较强的绿色荧光;而在高转移的HO-8910PM细胞中低表达,细胞质与细胞膜均有表达,但绿色荧光较弱。4.高转移细胞株HO-8910PM细胞的侵袭能力高于低转移细胞HO-8910细胞,但迁移能力二者差别不明显。5.细胞粘附力检测20min前两株细胞的粘附能力没有明显差别,20min、40min时高转移细胞株HO-8910PM细胞与细胞外基质的粘附能力明显高于低转移细胞株HO-8910细胞,但100min后两种细胞基本全部粘附,其细胞粘附能力没有明显差别。三、β-catenin在常用化疗药物表阿霉素作用过程中的研究表阿霉素是蒽环类抗肿瘤药物,它通过插入DNA碱基对使DNA降解,抑制DNA拓扑异构酶Ⅱ,影响DNA转录而实现肿瘤的治疗作用[2]。表阿霉素对包括卵巢癌在内的多种肿瘤细胞系具有良好的抑制增殖、诱导凋亡的作用;是治疗卵巢癌、预防卵巢癌术后复发和卵巢癌复发后介入治疗的最常用化疗药物[3]。试验一提示了β-catenin与卵巢癌转移侵袭之间的密切关系。而表阿霉素在抑制肿瘤转移侵袭方面的强大作用有目共睹,故综合上述情况提示:表阿霉素抗卵巢癌转移侵袭的作用与β-catenin这个因子之间是否有一定关系?如果有关系,那又是怎样相互作用的?是否有一定的剂量依赖性?本实验将正常HO-8910细胞做为对照组,用Westernblot分别检测正常HO-8910及及表阿霉素处理后HO-8910细胞中的β-catenin蛋白的表达,结果:实验组水平显著高于对照组。随阿霉素浓度逐渐增高,其表达强度逐渐增强。结论:阿霉素的抗肿瘤作用可能与β-catenin有密切关系。