论文部分内容阅读
在世界范围内,食管癌高发区包括：中国、南美、西欧、南非、日本和前苏联地区。90年代以来,某些危险因素得到有效的干预改善后,河南省食管癌发病率和死亡率逐渐呈缓慢下降趋势,但还是明显高于全国平均水平。Eph基因由于在分泌红细胞生成素的人类肝细胞癌细胞株中高表达而被命名,是受体酪氨酸激酶基因家族中最大的一个亚群,参与细胞生长、分化、胚胎发育及细胞内信号转递等过程,有相当重要的生理功能。EphA1基因是受体酪氨酸激酶Eph家族中的第一个成员,位于染色体7q34。ephrinA3是EphA1的主要配体之一,已经发现,在人类癌症的EphAl表达水平是可变的,但是EphA1和ephrinA3在食管癌中的研究却很少。目的分析EphA1和ephrinA3 mRNA的表达水平与患者的病理参数之间的关系,研究这两个分子表达的临床意义。在食管癌组织标本中对EphA1和ephrinA3的表达进行了蛋白水平上的检测,并利用食管癌细胞系,初步考察了ephrinA3在食管癌细胞生物学方面的功能,从不同层次和角度对ephrinA3及EphA1在食管癌中的作用,功能及临床意义进行了研究和探讨。材料与方法1对象选择、组织样本的采集与患者临床资料的收集选取2007-2008年在林州市肿瘤医院就医的食管癌患者为研究对象,采集术后患者食管癌原发灶及其匹配的正常食管组织有效标本92对。收集病人的临床资料,便于统计分析和研究。2样本中EphA1/ephrinA3 mRNA水平的测定采用real-time PCR测定食管癌患者癌组织及匹配正常组织中EphA1/ ephrinA3基因mRNA的表达水平。3样本中EphA1和ephrinA3蛋白表达水平的检测及ephrinA3对食管癌细胞生长影响的测定通过Western blot和免疫组织化学染色法测定食管癌患者癌组织以及其匹配的癌旁正常组织中EphA1和ephrinA3的蛋白表达水平。在8株人类食管癌细胞系中检测ephrinA3的蛋白表达水平,最后选定ephrinA3本底表达水平最低的TE-12细胞系,构建ephrinA3的稳定表达株。然后,通过并用MTT比色法绘制细胞生长曲线,检测ephrinA3对食管癌细胞生长的影响。4统计学分析用SPSS12.0统计分析软件对数据进行分析。对Δ(ΔCt)进行配对t检验及相关分析。对食管癌样本EphA1和ephrinA3基因mRNA表达水平单个临床参数间的关系采用χ2检验,以α=0.05作为检验水准。结果1荧光定量PCR结果1.1 EphA1和ephrinA3基因在食管癌组织中mRNA表达水平在92对临床样品中,与配对的正常食管组织相比,有82例(89.13%)食管癌组织中的EphA1表达上调,在食管癌组织中EphA1基因的mRNA的表达与正常食管组织相比有统计学差异(t=-6.899,P<0.01)。有53(57.61%)例食管癌组织中的ephrinA3表达上调,在食管癌组织中ephrinA3基因的mRNA的表达与正常食管组织相比有统计学差异(t=-2.436,P<0.05)。1.2 EphA1和ephrinA3基因在食管癌组织中的mRNA表达与临床参数之间多因素分析肿瘤家族史组的食管癌组织中EphA1 mRNA的表达水平显著低于无肿瘤家族史组(χ2=5.838,P<0.05),不同病理类型间,EphA1 mRNA表达水平差异有统计学意义(χ2=9.660,P<0.01)。肿瘤家族史组的食管癌组织中ephrinA3 mRNA的表达水平显著低于无肿瘤家族史组(χ2=5.417,P<0.05),在淋巴结转移组食管癌组织中ephrinA3 mRNA的表达水平显著低于淋巴结未转移组(χ2=20.504,P<0.01),不同病理类型间,ephrinA3 mRNA表达水平差异有统计学意义(χ2=6.434,P<0.05)。2 Western Blot和免疫组化结果及EphA1和ephrinA3基因在食管癌组织中的蛋白表达与临床参数之间多因素分析肿瘤家族史组的食管癌组织中EphA1蛋白的表达水平显著低于无肿瘤家族史组(χ2=11.482,P<0.01)；不同病理类型间,EphA1蛋白表达水平差异有统计学意义(χ2=12.818,P<0.01)肿瘤家族史组的食管癌组织中ephrinA3蛋白的表达水平显著低于无肿瘤家族史组(χ2=10.391,P<0.01),在淋巴结转移组食管癌组织中ephrinA3蛋白的表达水平显著低于淋巴结未转移组(χ2=13.615,P<0.01)不同病理类型间,ephrinA3蛋白表达水平差异有统计学意义(χ2=7.525,P<0.05)3人类食管癌细胞系中ephrinA3的表达情况采用Western blot方法,检测了8株人食管癌细胞中ephrinA3的蛋白表达水平。结果显示：TE-12, Ec-9706, KYSE-180中表达水平较低。选用本底表达水平最低的TE-12细胞系构建ephrinA3的稳定表达株,以进一步考察ephrinA3对食管癌细胞的影响。结论1 ephrinA3和EphA1 mRNA和蛋白在食管癌组织较配对的正常食管组织表达下调。ephrinA3和EphA1 mRNA表达水平负相关,二者可能在肿瘤的发生发展中起协同作用。2 ephrinA3 mRNA和蛋白表达水平与肿瘤家族史、淋巴结转移以及病理类型密切相关。EphA1 mRNA和蛋白表达水平与家族史以及病理类型密切相关。3 ephrinA3可以抑制食管肿瘤细胞生长。4 ephrinA3和EphA1可能是食管癌转移的相关基因,ephrinA3基因可以抑制食管癌细胞的生长增殖,因此提示了ephrinA3用于食管癌治疗的潜力。