论文部分内容阅读
目的通过白细胞介素-4(Interleukin 4,IL-4)激活Janus激酶/信号传导及转录激活因子 6(Janus kinase/Signal transducer and activator of transcription,JAK/STAT6)信号通路,并以绿原酸(Chlorogenic acid,CGA)进行干预,通过分析该信号通路上相关分子蛋白及基因表达水平差异,探讨CGA抑制肝癌相关巨噬细胞向M2型极化的分子机制。方法选取RAW264.7和Ana-1两种细胞株,每株细胞分为6组:正常组、模型组、CGA高剂量组、CGA中剂量组、CGA低剂量组、奥沙利铂(Oxaliplatin,OXA)组。正常组无处理,其余组均使用50ng/mlIL-4刺激,IL-4持续作用24h后,药物组加入相应浓度药物持续干预12h,收集细胞及上清备用。在基因转录水平上采用RT—PCR方法检测IL-4刺激细胞后JAK/STAT6信号通路上相关分子mRNA表达量及药物对其的影响;在蛋白质水平上采用Western Blot法检测IL-4刺激细胞后JAK/STAT6信号通路上相关分子蛋白表达量及药物对其的影响;采用ELISA 法检测细胞因子转化生长因子β(Transforming growth factor beta,TGF—β)的表达。结果与正常组相比,RAW264.7细胞和Ana-1细胞模型组,细胞因子信号转导抑制子(Suppressor otf cytokine signaling 1,SOCS1)、Kruppel样因子4(Kruppel-like factor4,KLF4)、过氧化物酶体增殖物激活受体 γ(Peroxisome proliferator-activated receptor delta,PPARδ)mRNA表达水平增高(P<0.05);白细胞介素4受体α(Interleukin 4 receptor alpha,IL-4Rα)、STAT6 蛋白表达水平无明显变化,磷酸化信号传导及转录激活因子 6(Phospho-signal transducer and activator of transcription 6,pSTAT6)、KLF4、SOCS1、PPARγ、PPARδ的蛋白质水平及 TGF—β表达水平增高(P<0.05),差异具有统计学意义。与模型组相比,RAW264.7细胞和 Ana-1 细胞 CGA 高中剂量组 SOCS1、KLF4、PPARγ、PPARδ mRNA 表达及 pSTAT6、KLF4、SOCS1、PPARγ、PPARδ蛋白表达,TGF—β表达下降(P<0.05),差异具有统计学意义。OXA对PPARγ、PPARδ在蛋白质水平和基因水平上有一定程度的抑制作用,但抑制程度不如CGA明显。结论1.证实CGA可以抑制肿瘤相关巨噬细胞M2极化。2.JAK/STAT6信号通路是CGA抑制肝癌相关巨噬细胞M2极化的潜在分子机制之一。