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在反胶束技术萃取大豆蛋白质研究取得进展的基础上,针对表面活性剂AOT(丁二酸二异辛酯磺酸钠)在所提取的蛋白质中残留的问题,本文通过冷冻高速离心法和石英砂吸附分离法分离蛋白质和AOT,对进一步纯化蛋白质并回收AOT做了研究。
大豆蛋白经AOT反胶束技术萃取以后,研究了AOT在油脂相和蛋白相的分配。单因素试验中,冷冻高速离心法研究了各因素(离心速度、离心时间、离心温度、溶液pH值、NaCl添加量)对蛋白质得率和AOT残留率的影响;石英砂吸附分离法研究了各因素(CaCl2与石英砂的摩尔比、溶液pH值、吸附温度)对蛋白质得率和AOT残留率的影响。冷冻高速离心法通过响应面试验,分别确定了各因素对蛋白质得率和AOT残留率的交互作用。以蛋白质得率最高为评价指标,分离蛋白和AOT的最佳工艺条件为:离心机转速为8873r/min,离心时间为12.7min,离心温度为11.5℃,溶液pH为4.27,NaCl添加量为3.5﹪;以AOT残留率最低为评价指标,分离蛋白和AOT的最佳工艺条件为:离心机转速为9036r/min,离心时间为16.1min,离心温度为8.9℃,溶液pH为4.62,NaCl添加量为4.9﹪。石英砂吸附法通过响应面试验,分别确定了各因素对蛋白质得率和AOT残留率的交互作用。以蛋白质得率最高为评价指标,分离蛋白和AOT的最佳工艺条件为:CaCl2与石英砂的摩尔比为0.108,溶液pH为8.10,吸附温度为47.9℃;以AOT残留率最低为评价指标,分离蛋白和AOT的最佳工艺条件为:CaCl2与石英砂的摩尔比为0.071,溶液pH为9.91,吸附温度为40.2℃。
通过对两种分离方法得到的蛋白产品进行组分分析,发现冷冻高速离心法所得蛋白产品组分发生了改变,以高分子量亚基为主;石英砂吸附法所得蛋白产品亚基组成变化很小。通过荧光分析研究,发现中性条件下,蛋白质和AOT以某种方式结合,结合作用力可能主要是疏水力;通过改变溶液离子强度,发现AOT的存在方式发生改变,和蛋白质之间的作用方式也发生改变,这为分离蛋白质和AOT提供了依据。通过红外光谱分析研究,表明两种分离方法没有对蛋白质的二级结构造成影响。