RGD序列肽在口腔癌中的作用机理研究

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目的:1、利用RGDV体外干预人舌鳞状细胞癌脑转移亚系Tb细胞系,探讨RGDV对Tb细胞系增殖、凋亡的调控作用。2、利用RGDV对金黄地鼠颊囊癌模型进行靶向治疗,探讨RGDV在口腔自发成瘤体系中的作用。方法:1、RGDV对舌癌细胞增殖凋亡的研究(1)通过RGDV作用于Tb细胞,采用MTT比色法、平板克隆形成实验以及流式细胞仪细胞内抗原检测法检测PCNA蛋白的表达,观察RGDV对Tb细胞增殖的影响。(2)通过RGDV作用于Tb细胞系,采用FITC-AnnexinV/PI检测细胞凋亡、流式细胞仪检测细胞周期、Hoechst/PI双染法观察细胞形态、电镜观察细胞形态、DNA梯状电泳以及流式细胞仪细胞内抗原检测法检测Caspase-3蛋白的表达,观察RGDV对Tb细胞凋亡的影响。2、RGDV对金黄地鼠颊囊癌靶向治疗的研究建立金黄地鼠颊囊癌模型,利用RGDV对金黄地鼠颊囊癌模型进行靶向治疗,定期观察地鼠颊囊癌肿瘤体积变化,治疗结束后取颊囊癌组织。常规包埋、切片,免疫组织化学法检测治疗后组织中v-WF、Brdu的表达变化。统计分析实验结果。结果:1、RGDV对舌癌细胞增殖凋亡的研究(1)RGDV对Tb细胞增殖的影响:RGDV干预组Tb细胞增殖速度低于Con组,克隆形成率明显低于Con组(P<0.05);PCNA表达水平明显下调。(2)RGDV对Tb细胞凋亡的影响:RGDV组的凋亡细胞发生率明显增加,达到88.3%与Con组相比有显著性差异(P<0.05);Tb细胞复制被阻滞在S期;DNA电泳显示清晰的DNA Ladder;Hoechst/PI双染法观察到明显的凋亡细胞;Caspase-3蛋白的含量同Con组相比明显增多。2、RGDV对金黄地鼠颊囊癌靶向治疗的研究(1)利用RGDV对金黄地鼠颊囊癌模型进行靶向治疗后,肿瘤体积的变化结果:RGDV组地鼠肿瘤体积较Con组显著缩小(P<0.05)。(2)利用RGDV对金黄地鼠颊囊癌模型进行靶向治疗后,v-WF的表达结果:RGDV组和Con组v-WF均有表达,分别检测MVD(微血管密度),RGDV组MVD值显著低于Con组(P<0.05)。(3)利用RGDV对金黄地鼠颊囊癌模型进行靶向治疗后,Brdu的表达结果:RGDV组和Con组Brdu均有表达,分别检测PI(增殖指数),RGDV组PI值显著低于Con组(P<0.05)。结论:1、应用RGDV干预Tb细胞后,Tb细胞的增殖能力降低,提示RGDV抑制了Tb细胞的增殖能力;2、应用RGDV干预Tb细胞后,可诱导Tb细胞凋亡提示细胞凋亡途径可能是RGDV影响肿瘤形成的重要途径,并且RGDV可能通过Caspase-3信号通路诱导Tb细胞凋亡;3、应用RGDV作用金黄地鼠颊囊癌后,抑制了肿瘤细胞的增殖,抑制了肿瘤的生长。4、应用RGDV作用金黄地鼠颊囊癌后,降低了金黄地鼠颊囊癌的微血管密度,说明RGDV对肿瘤新生血管起抑制作用。
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