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免疫抑制药物是一类临床上被用于治疗自身免疫性疾病和移植排斥反应的重要药物，在人类疾病的治疗过程中有较好的应用价值。虽然已经有多种免疫抑制药物如环孢菌素A（CSA），他克莫司（FK506），甲氨蝶呤（MTX），硫唑嘌呤（AZA）和利妥昔单抗等已经应用于临床，但药物的毒性是使用这些免疫抑制药物广泛应用于临床的主要障碍。因此，期待开发新的、安全的用于治疗自身免疫性疾病和移植排斥反应的免疫抑制药物已久。中草药在疾病中的应用具有悠久的历史，由于中草药资源分布广泛，治疗过程中毒副作用较小，因此在治疗疾病方面具有十分明显的优势。本论文选择以中药单体为研究对象，从体外和体内两个方面研究中药单体对机体的免疫抑制作用，为其作为一种新的免疫抑制药物应用于临床提供实验依据。我们选用脾淋巴细胞增殖试验体外筛选具有免疫抑制活性的中药单体，使用MTT法进行脾淋巴细胞毒性和增殖试验。我们选取了八种中药单体在体外分别以不同的浓度作用于小鼠脾淋巴细胞（ConA或LPS刺激后）48h。实验筛选到三种具有潜在免疫抑制作用的中药单体，其中，漆黄素（FIS）能够有效地抑制T淋巴细胞增殖，棉酚（GOS）和瑞香素（DAP）能够有效地抑制T淋巴细胞和B淋巴细胞增殖，并且对小鼠脾淋巴细胞增殖呈现出剂量依赖性的抑制作用。在三种中药单体中，DAP是毒性最小的中药单体。因此，本研究中，我们选用具有较低毒性和潜在免疫抑制活性的DAP进行后续免疫抑制作用的研究。本研究旨在研究DAP对小鼠淋巴细胞的免疫抑制作用和基本机制。前期研究证明在体外，DAP能够抑制ConA和LPS诱导的小鼠脾细胞的增殖反应，提示其对T淋巴细胞和B淋巴细胞的增殖反应有直接的抑制作用。细胞增殖主要是通过细胞周期调控的，细胞周期由不同的连续的阶段（G0/G1，S，G2/M）组成。我们使用碘化丙啶染色法分析细胞周期分布情况，通过流式细胞术检测发现，随着DAP浓度的增加，处于G0/G1期的细胞数增加，处于S期和G2/M期的细胞数则减少，说明DAP是在G0/G1期阻断DNA合成来抑制小鼠淋巴细胞有丝分裂和细胞过度增殖。细胞因子是免疫系统重要的调节剂和效应剂。尤其是多种促炎细胞因子已被证明与多种自身免疫性疾病有关。在本研究中，我们使用的ConA作为T细胞有丝分裂原，选择Th1型细胞因子IL-2、IFN-γ和Th2细胞因子IL-4、IL-6用于检测DAP对Th1和Th2细胞的影响。结果表明，DAP可以显著抑制ConA诱导的小鼠脾细胞主要细胞因子分泌和mRNA的表达，提示其抑制细胞因子产生的作用环节在mRNA表达阶段。这些研究表明，DAP的免疫抑制作用与抑制细胞因子的产生与分泌有关系。细胞内Ca2+是一种典型的细胞内信使，它的许多细胞效应是通过钙调蛋白（CaM）转导，Ca2+/CaM复合物调节多种下游目标包括蛋白质激酶和磷酸酶。其中，与免疫相关的最重要的两条途径是受CaM调节的CaN-NFAT途径和CaMKⅡ-NF-κB途径。本试验通过使用ConA刺激小鼠T淋巴细胞，检测DAP对CaN-NFAT和CaMKⅡ-NF-κB信号转导通路的影响，从而探明DAP免疫抑制作用机制。我们的结果表明，在ConA组，[Ca2+]i浓度升高后与CaM结合，CaM使CaN和CaMKⅡ活化，CaN和CaMKⅡ使NFAT和NF-κB去磷酸化从细胞浆转位到细胞核中。正如预期的那样，DAP能够抑制ConA诱导的NFAT和NF-κB易位到细胞核来阻止T细胞的活化。为了对DAP的临床疗效提供客观的评价指标，我们通过使用5%的DNFB腹部致敏的方法建立DTH小鼠模型，分析DAP对DTH小鼠模型中胸腺和脾脏指数、T淋巴细胞增殖、CD4+T和CD8+T细胞的数量、细胞因子表达和小鼠耳组织水肿的影响，进一步验证DAP在体内的免疫抑制作用。结果显示与DTH模型组相比，DAP药物治疗组能够降低DTH小鼠胸腺指数和脾脏指数，使淋巴细胞的增殖程度受到抑制；耳廓组织学检测也表明DAP药物治疗组能明显减少淋巴细胞的浸润；DAP还能降低DNFB处理后的CD4+T和CD8+T细胞的数量，下调细胞因子的表达，证实了DAP对DTH模型有免疫抑制作用。我们还通过皮下注射卵清白蛋白（OVA）建立了OVA致敏小鼠模型，研究了不同浓度的DAP对OVA小鼠模型中B淋巴细胞增殖、细胞因子表达、OVA特异性总IgG和IgG亚类IgG1和IgG2a的抗体效价的影响。结果显示与OVA模型组相比，DAP能够显著抑制B淋巴细胞增殖，细胞因子表达和OVA特异性IgG、IgG1和IgG2a的抗体分泌，表明DAP能够同样减弱OVA致敏小鼠模型的免疫反应程度。综上所述，DAP对T和B淋巴细胞的增殖和分泌功能都有直接的抑制作用，表明DAP对体液免疫和细胞免疫反应都具有抑制作用；DAP在体外和体内都具有较强的免疫抑制活性，这表明DAP具有作为免疫抑制药物的潜在作用。本研究为DAP的更深入研究提供了基础，并为未来临床上的合理应用提供了理论依据，提高其在临床上的应用价值。