丙丁酚对高糖环境下人视网膜血管内皮细胞增殖及VEGF表达的影响

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目的研究不同浓度的丙丁酚(普罗布考probucol)对体外培养的高糖环境下人视网膜微血管内皮细胞(human retinal capillary endothelial cells, HRCECs)增殖及血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,为糖尿病视网膜病变药物防治提供新的思路和理论依据。方法体外培养从角膜移植术后获得的新鲜人眼球提取的HRCECs。取生长良好的第3~4代细胞用于实验,实验分为调零组、低糖对照组、高糖对照组、高糖+(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol /L、80μmol/L )不同浓度丙丁酚组,用噻唑蓝比色法(MTT)检测24h不同质量浓度的丙丁酚对高糖环境下HRCECs增殖的抑制作用,用免疫细胞化学法检测高糖下HRCECs中VEGF的表达。结果1、MTT比色法结果显示:低糖、高糖对照组及高糖+不同浓度的丙丁酚(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L )加药组作用于原代培养的HRCECs24h,吸光度A值分别为0.8172±0.0116,0.9317±0.0123,0.8628±0.0111,0.7608±0.0103,0.6455±0.0221,0.5600±0.0109,0.4775±0.0106,加药组细胞增生抑制率分别为8.40%、20.84%、34.90%、45.32%、55.38%。一定质量浓度范围内丙丁酚可抑制高糖环境下HRCECs的增殖(P<0.05),且随着药物浓度的提高,细胞抑制率逐渐提高。高糖对照组吸光度A值明显高于低糖对照组,两者相比差异有明显统计学意义(P<0.05)。2、低糖、高糖对照组及高糖+不同浓度的丙丁酚(5μmol/L、40μmol/L、80μmol/L)加药组作用于HRCECs24h,免疫细胞化学检测HRCECs中VEGF的表达,其背景灰度值与阳性灰度值之差分别为28.75±3.77、71.93±8.37、54.67±4.33、41.43±3.45、29.18±3.37。与高糖对照组相比,加药组作用HRCECs24h VEGF表达明显下降(P<0.05),且随着药物浓度的提高,VEGF的表达量逐渐减少。与低糖对照组相比,高糖对照组VEGF的表达明显增加(P<0.05)。结论1、丙丁酚能抑制体外培养的高糖环境下HRCECs的增殖,呈浓度依赖性;2、丙丁酚能下调体外培养的高糖环境下HRCECs中VEGF的表达,呈浓度依赖性;3、丙丁酚抑制体外培养的高糖环境下HRCECs的增殖可能是通过下调其VEGF表达而发挥作用。
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