论文部分内容阅读
哺乳类干扰素调节因子9(IRF9)很早之前就被认为是作为ISGF3复合物的亚单元，其在I型干扰素抗病毒感染中诱导干扰素刺激基因(ISG)的表达中至关重要。近期研究发现鱼类中也是通过诱导大量的干扰素刺激基因和干扰素自身来行使抗病毒能力，但是对于鱼类IRF9基因在干扰素信号中的作用知之甚少。我们从鲫鱼囊胚细胞系(CAB)里鉴定出和哺乳类同源的IRF9基因。通过过表达鲫IRF9的绿色荧光融合蛋白，我们发现鲫IRF9凭借自身两个核定位信号(NLS)使其能够组成型的在细胞核内表达。这两个NLS分别位于DNA结合区(DBD)内部和紧随DBD之后。有意思的是人类仅仅拥有和鲫IRF9.同源的前面的NLS。
过表达鲫IRF9不仅能够激活上调含ISRE位点的启动子活性提高，而且还能使ISG基因转录水平上调。振奋人心的是，鲫IRF9和鲫STAT2一起过表达显著提高鲫干扰素启动子活性。我们还发现阻断鲫IRF9能够有效抑制鲫干扰素自身诱导的鲫干扰素启动子活性。
此外，IRF9不仅仅是转录因子，它还是一个典型的干扰素刺激基因。在预处理过的CAB细胞中，通过RT-PCR或westernblot检测到CaIRF9的表达。我们发现鲫IRF9能够强烈地被IFNγ诱导表达，而I型干扰素诱导微弱地上调。随后的斑马鱼IRF9基因启动子活性实验也印证了这样的结论。通过对斑马鱼IRF9基因5’侧翼序列一系列的分析检测，我们鉴定出斑马鱼IRF9基因启动子上三个重要调控位点，分别为ISRE，GAS和GATE。尽管ISRE和GAS位点是调控斑马鱼IRF9转录所必须的，但是在STAT1被阻断的情况下，IFN-γ能够诱导C/EBP-β蛋白与GATE位点结合调控IRF9的转录，因此GATE位点显得举足轻重。有意思的是，斑马鱼IRF9基因启动子拥有三个GATE位点，但是并不都是同等重要。通过一系列实验证实靠近转录起始位点的GATE位点才是最重要的。
本篇论文也提供证据证实Ⅱ型干扰素通过诱导IRF9的表达而间接诱导Ⅰ干扰素;与此形成鲜明对比的是，Ⅰ型干扰素几乎不能诱导Ⅱ型干扰素启动子活性上调。此外，过表达IRF3、IRF7和IRF9能够诱导斑马鱼I干扰素启动子活性上调，但是斑马鱼IFN4除外。
总而言之，本篇论文表明干扰素可能通过JAK-STAT信号通路诱导ISG和干扰素自身表达，因此我们认为JAK-STAT信号通路从鱼类到哺乳类都是保守的。