【摘 要】
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目的:在进行成骨细胞培养的基础上,探讨不同剂量氟对体外培养乳鼠成骨细胞增殖的影响;检测氟对成骨细胞TM9SF1mRNA基因表达及分布的影响;同时检测氟对人成骨细胞中TM9SF1mRNA
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目的:在进行成骨细胞培养的基础上,探讨不同剂量氟对体外培养乳鼠成骨细胞增殖的影响;检测氟对成骨细胞TM9SF1mRNA基因表达及分布的影响;同时检测氟对人成骨细胞中TM9SF1mRNA表达量的影响。方法:进行成骨细胞的原代培养并通过碱性磷酸酶和钙结节染色方法进行细胞来源鉴定;染氟组按照剂量分为5组,即0.0mg/L(对照组),2.5、5.0、10.0、20.0mg/L组,在MTT法中增加了5组分别为40.0、60.0、80.0、100.0、120.0 mg/L组;采用MTT的方法检测染氟后成骨细胞的增殖情况;采用原位杂交、半定量RT-PCR的方法检测染氟后小鼠成骨细胞中TM9SF1mRNA表达量的变化;采用Real-time PCR的方法测定染氟后人成骨细胞中TM9SF1mRNA表达量的变化。结果:成骨细胞生长稳定、纯化效果好,完全适合建立氟中毒的体外模型;氟对成骨细胞的增殖的影响:低剂量的氟化钠能够促进成骨细胞的增殖,高剂量的氟化钠则抑制成骨细胞的增殖;小鼠成骨细胞染氟10天后各剂量组成骨细胞中TM9SF1基因均有阳性表达,染氟组表达明显高于对照组,表达范围也明显大于对照组;半定量RT-PCR法显示:TM9SF1mRNA基因表达量为2.5mg/L组大于对照组也大于其它剂量组;TM9SF1mRNA相对定量显示,人的各组成骨细胞中均有TM9SF1mRNA存在,但染氟后影响了各组细胞中TM9SF1mRNA的表达量,以2.5、5.0mg/L组最高,分别是对照组的1.04、1.03倍,随着剂量的增高,TM9SF1mRNA的表达量呈现下降趋势。结论:低剂量的氟可以促进小鼠成骨细胞的增殖,高剂量的氟则表现抑制作用。氟作用于成骨细胞后可以影响TM9SF1mRNA基因表达的分布和含量,说明染氟剂量不同对TM9SF1基因表达有影响,低剂量的氟能促进TM9SF1mRNA基因的表达,而高剂量的氟则使TM9SF1mRNA基因的表达减弱。TM9SF1基因表达强弱与成骨细胞的增殖高低有相同的趋势,提示低剂量的氟能够使成骨细胞增殖活跃,可能是由于氟的作用下致使TM9SF1的存在而造成的,在氟骨症患者中TM9SF1基因有可能促进成骨细胞的增殖,从而促使成骨细胞生长旺盛,功能增强,在体内表现为骨质增加等一系列骨病变,对此还应该做进一步研究。
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