结核病是一种慢性缓发由结核分枝杆菌引起的的传染病。而结核分枝杆菌中存在一种假想蛋白,是一类目前功能未知,但是又实实在在存在的蛋白。在结核分枝杆菌中这种类型的假想蛋白占总蛋白的一半以上。本文所研究的结核蛋白Rv3899c就是一种假想蛋白,根据预测,在分枝杆菌属中属于高度保守的分泌蛋白。在最近的研究中被鉴定为一个潜在的免疫原。本研究以结核分枝杆菌H37Rv基因组做为模板,通过聚合酶链式反应扩增出目的基因,以pET28a作为载体质粒,构建出pET28a-Rv3899c的原核表达载体。用IPTG对重组蛋白进行了诱导表达,免疫印迹法检测该重组蛋白正确表达。通过亲和层析和分子排阻层析两种纯化方法对该蛋白进行纯化,最终得到了带有His标签的高纯度的重组蛋白。为了解析该重组蛋白的空间结构,利用蛋白晶体生长试剂盒对pET28a-Rv3899c重组蛋白进行晶体初筛,一周后发现在Index78,Index83,Index84,Index95这四个条件下有晶体长出,通过对蛋白浓度及晶体生长温度的优化最终得到了理想的蛋白晶体。晶体捞出做N端测序,发现结晶的蛋白氨基酸序列开始于GATAG,说明结晶的蛋白只是Rv3988c的一个片段序列,从184位到410位。通过X-Ray对Rv3899c184-410蛋白晶体进行衍射,其分辨率在1.9 A。采用浸泡重原子的方法需要进一步确定相位。为了探索Rv3899c的生物学功能,采用GST垂钓和结核分枝杆菌蛋白质组芯片技术两种方法从结核分枝杆菌全蛋白中找到与Rv3899c相互作用的蛋白。通过蛋白质组芯片技术筛选出84个蛋白与Rv3899c存在相互作用,其中信号较强的为Rv3420c,Rv3709c,Rv0914c,其功能为使N端丙氨酸乙酰化、使L-天冬氨酸磷酸化、参与脂代谢的降解途径。关于其相互作用的真实性还需要其他体外或体内方式进一步验证。