传染性支气管炎(Infectious bronchitis，IB)是一种由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)感染引起的急性、高度传染性的家禽病毒性疫病，长期以来一直危害家禽的健康养殖。IBV所属的冠状病毒是目前最大的RNA病毒，以往IBV反向遗传通过多片段扩增后连接，然后转染细胞拯救感染性克隆。但是由于基因组较长而较难找到合适的载体和限制性位点，传统的酶促连接方法具有局限性。本实验室在之前研究中，将IBV H120基因组的全长cDNA分为四个片段扩增，构建到细菌人工染色体质粒中获得pBeloBAC11(CMV)H120F1，F2，F3和F4(HB)四个片段亚克隆载体。为了研究S1基因是否与IBV感染宿主的致病力有关，在本研究中，通过设计引物，以致病性强的野毒株SC021202感染鸡胚尿囊液并抽提核酸为模板扩增SC021202S1基因，同时以pBeloBAC11H120F4为模板反向扩增含有载体序列并缺失H120S1序列的H120F4(HB)-△S1，通过同源重组的方法完成H120F4(HB)/SCS1的构建得到第四个片段，在此基础上，运用同源重组的方法分别将pBeloBAC11(CMV)H120F1与pBeloBAC11F2融合，将pBeloBAC11F3和pBeloBAC11F4(HB)/SCS1融合获得pBeloBAC11(CMV)H120F12和pBeloBAC11F34(HB)/SCS1亚克隆载体。再完成这两个片段的融合，最终完成IBV H120FL/SCS1cDNA克隆载体的构建。用构建好的全长cDNA的质粒转染BHK-21细胞，48h后收获细胞上清接种10日龄SPF鸡胚，在鸡胚中连续传代3次后，收集鸡胚尿囊液，通过测序鉴定替换序列和沉默突变位点，通过IFA检测病毒的M蛋白，通过WB检测病毒的N蛋白，最终确定获得拯救病毒rH120/SCS1。
　　为了利用建立的IBV感染性克隆构建平台进一步研究IBV的致病机制。我们运用104.5EID50重组病毒rH120/SCS1感染7日龄SPF雏鸡，并与相同剂量的H120、rH120和SC021202毒株感染鸡相比较，结果发现重组病毒rH120/SCS1对雏鸡的致病性与H120和rH120的致病性相当，没有引起雏鸡明显的发病症状和病理变化。而野毒则引起30％的雏鸡死亡，感染鸡出现呼吸症状和肾肿大等病变。结果说明高致病性IBV SC021202分离株的S1基因不能导致弱毒株具有致病性。此外，分别用H120，rH120和rH120/SCS1免疫雏鸡后14d用105.85EID50SC021202进行攻毒，结果显示攻毒SC021202后的H120，rH120和rH120/SCS1组均未出现雏鸡死亡现象，而攻毒SC021202的阴性组出现50％死亡率，结果表明H120，rH120和rH120/SCS1均可以对SC021202提供免疫保护作用。
　　IBV反向遗传平台的成功构建为今后深入研究IBV变异和致病机制提供了有效工具。