A型流感病毒(InfluenzaAviruses，IAV)是一种高度传播的呼吸道病原体，不仅具有相当高的发病率和死亡率，而且还具有大流行的趋势，几个世纪以来一直威胁着公共卫生安全。A型流感病毒基因组由分节段的负链RNA组成，其主要编码15种病毒蛋白。聚合酶碱性蛋白1(PB1)和聚合酶碱性蛋白2(PB2)分别由第2节段RNA和第1节段RNA编码，在病毒的转录和复制中承担着重要作用，同时PB2蛋白还与病毒的毒力相关。
　　本研究以实验室保存的重组质粒4664PB1和4664PB2为模板，利用PCR技术分别扩增PB1截短片段(sPB1)和PB2截短片段(sPB2)，构建原核表达载体pET-28a(+)-H7N9-sPB1和pET-32a(+)-H7N9-sPB2。然后转化至表达宿主菌E coli BL21中进行His-sPB1和His-sPB2重组蛋白的表达与纯化。接着以纯化的His-sPB1和His-sPB2分别免疫BALB/c小鼠，采用单克隆抗体（单抗）技术成功获得3株稳定分泌抗PB1单抗的细胞株5G5、2H3和5E8，4株稳定分泌抗PB2单抗的细胞株3C4、3D9、6B8和6F11。
　　对3株抗PB1单抗进行抗体特性的研究。5G5、2H3和5E8单抗腹水ELISA效价均可达105以上，IFA和Western Blot(WB)检测结果显示3株单抗均能与H7亚型PB1蛋白发生特异性反应。同时3株单抗还可用于免疫共沉淀实验。3株单抗的重链均为IgG1,轻链均为κ链，其识别的抗原区域均位于C端630～699aa内。单抗的通用性验证结果表明3株单抗均具有通用性，能与13种亚型(H1N1、H2N2、H3N2、H4N6、H5N1、H6N5、H7N9、H8N4、H9N2、H10N7、H11N9、H12N5、H13N6)的IAV PB1蛋白均发生反应。
　　对4株抗PB2单抗进行抗体特性的研究。3C4、3D9、6B8和6F11单抗腹水ELISA效价均可达105以上，WB检测结果显示4株单抗均能与H7亚型PB2蛋白发生反应，IFA检测结果显示仅有6F11单抗能与H7亚型PB2蛋白发生反应，同时4株单抗还可用于免疫共沉淀实验。3C4和6B8的重链为IgG1，3D9和6F11的重链为IgG2b，轻链均为κ链。4株单抗识别的抗原区域均位于C端708～760aa内。单抗的通用性验证结果表明6F11单抗具有通用性，能与13种亚型(H1N1、H2N2、H3N2、H4N6、H5N1、H6N5、H7N9、H8N4、H9N2、H10N7、H11N9、H12N5、H13N6)的IAV PB2蛋白发生反应。
　　A型流感病毒PB1和PB2单克隆抗体的制备和特性研究对PB1和PB2蛋白结构与功能、流感病毒致病机制和防控措施的研究具有实用价值。