论文部分内容阅读
糖尿病是危害人类健康的代谢紊乱性疾病,其并发症可严重影响患者的生命质量。糖尿病时海马损伤可引起以获得性认知和行为缺陷为特征的认知功能障碍,因此糖尿病海马损伤的防治成为糖尿病及其并发症研究领域的重要课题。丝胶为茧丝中含有多种生物活性的水溶性蛋白质,约占蚕茧的30%,但在缫丝时常被废弃,学者们一直在探讨如何有效利用如此大量的优质蛋白质。目前,丝胶在治疗糖尿病方面的作用,仅有少数国内学者进行了初步探讨,发现其可有效降低血糖。本研究采用链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)致2型糖尿病大鼠模型,探讨丝胶对2型糖尿病大鼠海马损伤的保护作用,为防治糖尿病海马损伤开辟新途径。第一部分丝胶对2型糖尿病大鼠海马HO-1表达的影响目的：观察丝胶对大鼠海马血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)表达的影响。探讨丝胶对2型糖尿病大鼠海马神经元的保护作用及可能机制。方法：1.48只SD大鼠随机分为4组,正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组,每组12只。糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组大鼠均采用STZ连续腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。待模型成功建立后,模型组大鼠不再作任何处理；丝胶治疗组大鼠给予丝胶灌胃(2.4g/kg/d),阳性对照组大鼠给予二甲双胍(55.33mg/kg/d)灌胃,时间均为35天。2.采用葡萄糖氧化酶法检测各组大鼠的血糖(blood glucose, BG)。3.采用Western Blotting法检测海马HO-1蛋白的表达。4.采用RT-PCR法检测海马HO-1mRNA的表达。结果：1.各组大鼠的BG.糖尿病模型组大鼠的BG为(29.45±4.82)mmol/L明显高于正常对照组大鼠(P<0.01)；丝胶治疗组、阳性对照组大鼠的BG分别为(13.20±4.09) mmol/L、(13.18±2.30) mmol/L,明显低于糖尿病模型组大鼠(P<0.01)；且丝胶治疗组与阳性对照组比较无明显差异(P>0.05)。2.糖尿病模型大鼠海马HO-1蛋白及mRNA的表达均明显高于正常对照组大鼠(P<0.01)。且丝胶治疗组与阳性对照组比较无明显差别(P>0.05)。结论：丝胶可通过下调海马中HO-1的表达,减轻海马神经元损伤,发挥对糖尿病海马损伤的保护作用。第二部分丝胶对2型糖尿病大鼠海马GH/IGF-1轴的作用目的：探讨丝胶对2型糖尿病大鼠海马生长激素(growth hormone, GH)/胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor-1, IGF-1)轴的作用。方法：1.48只SD大鼠随机分为4组,正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组,每组12只。糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组大鼠均采用链尿佐菌素(Streptozotocin,STZ)连续腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。待模型成功建立后,模型组大鼠不再作任何处理；丝胶治疗组大鼠给予丝胶灌胃(2.4g/kg/d),阳性对照组大鼠给予二甲双胍(55.33mg/kg/d)灌胃,时间均为35天。2.采用ELISA法检测各组大鼠血清GH和IGF-1水平。3.采用Western Blotting法检测海马GH和生长激素受体(growth hormone receptor, GHR)蛋白的表达。4.采用RT-PCR法检测海马GH. GHR和IGF-1mRNA的表达。结果：1.各组大鼠血清GH和IGF-1水平：糖尿病模型大鼠GH水平为(2.56±1.13) ng/ml,明显高于正常大鼠(P<0.05)；IGF-1水平为(520.20±121.81) ng/ml,明显低于正常大鼠(P<0.01)。丝胶治疗组、阳性对照组大鼠GH水平分别为(1.36±0.57) ng/ml.(1.37±0.64) ng/ml,均明显低于糖尿病模型组大鼠(P<0.01)；IGF-1水平分别为(981.10±180.88) ng/ml、(1021.10±198.32) ng/ml,均明显高于糖尿病模型组大鼠(P<0.01)；且丝胶治疗组与阳性对照组比较无明显差异(P>0.05)。2.各组大鼠海马GH的表达：糖尿病模型组大鼠海马GH蛋白及mRNA的表达均明显高于正常组大鼠(P<0.01)；丝胶治疗组和阳性对照组大鼠海马GH蛋白及mRNA的表达明显低于糖尿病模型组大鼠(P<0.01, P<0.05);且丝胶治疗组与阳性对照组比较无明显差异(P>0.05)。3.各组大鼠海马GHR的表达：糖尿病模型组大鼠海马GHR蛋白及mRNA的表达明显低于正常组大鼠(P<0.01)；丝胶治疗组和阳性对照组大鼠海马GHR蛋白及mRNA的表达明显高于糖尿病模型组大鼠(P<0.01,P<0.05)；且丝胶治疗组与阳性对照组比较无明显差异(P>0.05)。4.各组大鼠海马IGF-1的表达：与正常对照组大鼠比较,糖尿病模型组大鼠海马IGF-1mRNA的表达明显下降(P<0.01)；丝胶治疗组、阳性对照组大鼠海马IGF-1mRNA的表达较糖尿病模型组大鼠明显升高(P<0.01)；且丝胶治疗组与阳性对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论：1.糖尿病大鼠存在GH/IGF-1轴紊乱,表现为血GH水平升高、IGF-1水平降低,海马GH的表达升高、GHR和IGF-1的表达降低。2.丝胶可通过调节糖尿病时GH/IGF-1轴紊乱,改善海马损伤。第三部分丝胶对2型糖尿病大鼠海马Akt信号转导通路的作用目的：探讨丝胶对2型糖尿病大鼠海马蛋白激酶B (Akt)信号转导通路的作用。方法：1.48只SD大鼠随机分为4组,正常对照组、糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组,每组12只。糖尿病模型组、丝胶治疗组和阳性对照组大鼠均采用链尿佐菌素(Streptozotocin,STZ)连续腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型。待模型成功建立后,模型组大鼠不再作任何处理；丝胶治疗组大鼠给予丝胶灌胃(2.4g/kg/d),阳性对照组大鼠给予二甲双胍(55.33mg/kg/d)灌胃,时间均为35天。2.采用Western Blotting法检测海马p-Akt、核转录因子kaPPa B (NF-κB)和前凋亡因子Bad (Bcl-XL/Bcl-2associated death Promoter)蛋白的表达。3.采用RT-PCR法检测海马p-Akt, NF-κB和Bad mRNA的表达。结果：1.各组大鼠海马p-Akt的表达：糖尿病模型组大鼠海马p-Akt蛋白及mRNA的表达均明显低于正常组大鼠(P<0.01)；丝胶治疗组和阳性对照组大鼠海马p-Akt蛋白及mRNA的表达明显高于糖尿病模型组大鼠(P<0.01, P<0.05);且丝胶治疗组与阳性对照组比较无明显差异(P>0.05)。2.各组大鼠海马NF-κB的表达：糖尿病模型组大鼠海马NF-κB蛋白及mRNA的表达明显低于正常组大鼠(P<0.01)；丝胶治疗组和阳性对照组大鼠海马NF-κB蛋白及mRNA的表达明显高于糖尿病模型组大鼠(P<0.01)；且丝胶治疗组与阳性对照组比较无明显差异(P>0.05)。3.各组大鼠海马Bad的表达：与正常对照组大鼠比较,糖尿病模型组大鼠海马Bad蛋白及mRNA的表达均明显升高(P<0.01)；丝胶治疗组与阳性对照组大鼠海马NF-κB蛋白及mRNA的表达较糖尿病模型组大鼠明显降低(P<.01)；且丝胶治疗组与阳性对照组比较无明显差异(P>0.05)。结论：丝胶可通过上调p-Akt, NF-κB的表达,下调Bad的表达,改善糖尿病时海马Akt信号转导通路的异常,发挥对糖尿病海马损伤的保护作用。