近年来多糖的研究颅受重视，越来越多的研究者期望从天然产物中寻找活性更高，特别是对肿瘤等难治性疾病更为有效的多糖。仙草（Hesona Procumbens Hemsl），一年生唇形科草本宿根植物，具有清热解毒、延年益寿等独特的药用价值，是我国传统的药食兼用型植物。仙草多糖（polysaccharides extracted from Mesona Procumbens Hemsl，PMPH）是从仙草全草中提取的活性物质，对其进行深入研究，具有重要的开发价值和实用意义。 本研究采用体外实验的方法，以过氧化氢（H₂O₂）为氧化损伤剂，从细胞和分子生物学水平，对仙草多糖的抗氧化功能进行研究，并初步探讨了其作用机理。1．仙草多糖对H₂O₂所致大鼠肝匀浆脂质过氧化和抗氧化酶——超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（glutathion peroxidase，GSH-px）活性的影响 SD大鼠断颈处死，迅速取其肝脏，制成5％肝匀浆。取灭菌试管20只，加入5％肝匀浆各2ml，随机分为4组：空白对照组，仙草多糖处理组Ⅰ（1mg／ml），仙草多糖处理组Ⅱ（2.5mg／ml），仙草多糖处理组Ⅲ（5mg／ml），每组5管，分别加入不同浓度的仙草多糖溶液2ml（空白对照组以生理盐水代替）及200μl3％H₂O₂溶液，混匀，置37℃水浴箱中振荡温浴6h后，测定混合体系中脂质过氧化产物丙二醛（malondialdehyde，MDA）的含量及抗氧化酶SOD、GSH-px活性。另取试管20只，分别加入5％肝匀浆、2.5mg／ml仙草多糖各2ml，及3％H₂O₂溶液200μl，随机分为4组，每组5管，体外分别温育3h、6h、12h和24h，同法测定其中MDA的含量。 结果显示：仙草多糖能显著降低H₂O₂所致大鼠肝匀浆脂质过氧化产物MDA的生成，且在一定浓度范围内呈现剂量一效应关系，其中5mg／ml浓度的仙草多糖对MDA生成的抑制率超过50％，显示了较强的抗氧化能力：2.5mg／ml的仙草多糖与大鼠肝匀浆体外共温育3、6、12、24h后，其MDA的抑制率也一直维持在40％以上。仙草 浙江大学硕士学位论文 中文摘要 多糖可显著增强大鼠肝匀浆中GSH－pX的酶活性（p＜0．01），但对SOD酶活性无明显 影响，GSH－pX活性和MI)A生成量之间存在显著的负相关（p＜0．of），提示仙草多糖抗 细胞脂质过氧化可能与其提高大鼠肝匀浆中GSH－PX酶活性的作用有密切关系。 2．仙草多糖对原代培养脾淋巴细胞DNA氧化损伤的影响 采用单细胞凝胶电泳（single cell gel electrophoresis，SCGE）的方法检测不 同浓度的H。0。溶液对原代培养脾淋巴细胞DNA的损伤及仙草多糖对DNA损伤的保护作 用。原代培养24h的脾淋巴细胞悬液随机分为4组，加入不同浓度的H。0。溶液25 yi， 使其终浓度分别 25 u mol／L、50 n。of儿和 125 u。。l几，空白对照组加入等量的 PBS 溶液，4’C下染毒20分钟，收获细胞进行SCGE。另将原代培养的脾淋巴细胞随机分 为6组，多糖处理组用不同浓度的仙草多糖溶液预先处理60分钟，对照组加入等量 的 RPMI 1640培养基，然后均加入 50 u mol／L的 H。0。染毒 20分钟，同法进行 SCGE。 最后用激光共聚焦显微镜拍摄图像，计算替星细胞的发生率和总替星长度。 结果显示H。02可致原代培养的脾淋巴细胞的DNA严重损伤，且随着浓度的增加 DNA的损伤加重，替星细胞的拖尾率和尾长均显著增强（P＜0．05），而仙草多糖能不 同程度地降低 H。02诱导产生的 DNA损伤，在 10－100 n g／ml的浓度范围内，随着仙草 多糖浓度的增加，抗损伤作用加强，呈现一定的剂量－效应关系。 结论： 仙草多糖具有显著的抗氧化功能，能在一定浓度范围内保护细胞免受氧自由基 对脂质过氧化和DNA氧化损伤的影响，其作用机制可能与仙草多糖具有清除H。02诱导 产生的氧自由基及其与PUFA作用的脂质过氧化链式反应有关。仙草多糖可用于提高 机体的抗氧化能力。