论文部分内容阅读
目的：探讨急性肝衰竭（ALF）大鼠模型肠道防御素-5(RD-5)、分泌型磷脂酶A2（sPLA2）和溶菌酶(Lysozyme)表达变化及与细菌移位的关系。方法：清洁级常规喂养雄性SD大鼠，1周后随机分为正常对照组和ALF模型组。正常对照组8只，腹腔注射0.9%氯化钠溶液1.2ml/100g；ALF模型组40只，按造模后不同观察时间点分为8、16、24、48、72小时5个时间亚组，每组8只，一次性腹腔注射10%D-氨基半乳糖1.2ml/100g。于各相应时间点处死大鼠，进行以下指标检测：①取各组肝、脾和肠系膜淋巴结组织匀浆进行细菌培养；②检测血清ALT、AST、Tbil、Alb水平；③肝组织和末段回肠组织经HE染色后光镜下观察病理变化；④RT-PCR法检测各组末段回肠RD-5、sPLA2、LysozymemRNA表达；⑤Western blot和免疫组化法检测sPLA2和Lysozyme蛋白表达。组间均数比较采用单因素方差分析。结果：1、急性肝衰竭模型组ALT、AST逐渐升高，于48h达到高峰，并出现总胆红素明显升高，随后转氨酶下降，总胆红素继续上升。模型组72h肝脏组织正常结构消失，呈大片融合坏死，超过整个切片面积的2/3，残留少量肝细胞，汇管区及坏死区可见大量炎性细胞浸润，肝窦充血、出血明显，符合急性肝衰竭病理改变，成功诱导急性肝衰竭模型。2、正常对照组未出现脏器细菌培养阳性，模型组24h、48h和72h脏器细菌移位率分别为8.3%、37.5%和58.3%，但是，72h大鼠模型的末端回肠结构尚完整，未见粘膜上皮细胞明显脱落坏死情况。3、模型组大鼠回肠RD-5、sPLA2mRNA在早期逐渐升高，16h上升至高峰（1.291±0.153、1.131±0.128），与对照组（0.725±0.116、0.722±0.112）比较差异有统计学意义（t=69.25、95.71，均P=0.000），随后逐渐下降，72h（0.415±0.104、0.425±0.076）明显低于对照组（t=31.55、44.98，均P=0.000）；对照组LysozymemRNA为0.853±0.093，模型组早期亦升高，8h上升至高峰(1.211±0.107)，最后下降，72h(0.704±0.103），明显低于对照组（t=9.224；p=0.009）。Western blot法检测sPLA2和Lysozyme蛋白表达，对照组分别为0.583±0.121和0.650±0.093，模型组72h分别为0.327±0.086和0.382±0.057，均明显低于对照组（t=12.28、15.83，p=0.004、0.001）。sPLA2蛋白在对照组回肠潘氏细胞内呈粗颗粒棕色信号，而在模型组72h时仅可见少量点状棕色信号分布；Lysozyme蛋白在对照组回肠所有潘氏细胞中呈粗颗粒强信号，而在模型组72h时在部分潘氏细胞中呈散在点状信号。结论：急性肝衰竭大鼠模型的回肠粘膜免疫屏障功能下降，随着潘氏细胞RD-5、sPLA2和Lysozyme的表达下降，脏器细菌移位率增加，且不伴有明显肠粘膜损伤的发生。