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目的:(1)初步探讨小鼠口腔癌模型骨髓单个播散细胞基因组的检测方法。(2)初步探讨小鼠口腔癌模型舌重度异常增生时期骨髓播散细胞RB1CC1基因纯合性缺失及其意义。方法:(1)4NQ0饮水法建立小鼠口腔癌淋巴道转移模型。定期处死小鼠,收集双侧股骨,Ficoll密度梯度离心法提取骨髓单个核细胞层的细胞,并制作细胞涂片。以细胞角蛋白(CK)多克隆抗体为一抗免疫组化染色细胞涂片。小鼠的舌部进行常规HE染色检测。(2)收集35只小鼠口腔癌模型舌重度异常增生时期骨髓单个核细胞涂片,激光捕获显微切割技术(LCM)捕获细胞涂片上的单个CK阳性(CK+)细胞。(3)单细胞全基因组扩增技术(WGA)扩增单个细胞的DNA。(4)聚合酶链反应(PCR)检测其视网膜母细胞瘤诱导卷曲蛋白(RB1CC1)基因的第二、第六和第七外显子纯合性缺失情况,并与舌部正常,重度异常增生以及鳞癌组织各4例对照。结果:(1)LCM切割46个CK+细胞,成功从35只小鼠骨髓涂片各捕获1个CK+细胞,总共35个细胞,成功率76%。(2)扩增CK+细胞35个,单细胞WGA扩增成功且PCR成功扩增出内参GAPDH的单细胞为3个,成功率8.6%。(3)RB1CC1基因第二外显子纯合性缺失情况分别为单个CK+细胞(2/3),舌癌变组织(2/4),舌部正常组织(0/4),重度异常增生组织(0/4);RB1CC1基因第六外显子纯合性缺失情况分别为单个CK+细胞(0/3),舌癌变组织(0/4),舌部正常组织(0/4),重度异常增生组织(0/4);RB1CC1基因第七外显子纯合性缺失情况分别为单个CK+细胞(0/3),舌癌变组织(0/4),舌部正常组织(0/4),重度异常增生组织(0/4)。结论:(1)LCM技术结合单细胞WGA技术以及PCR技术可应用于小鼠口腔癌模型骨髓播散细胞基因突变的分析。(2)小鼠口腔癌模型重度异常增生时期骨髓CK+细胞有RB1CC1基因第二外显子的纯合性缺失突变,该时期骨髓CK+细胞可能是播散肿瘤细胞。