基于新一代测序筛选急性心肌梗死相关的血清外泌体miRNA差异表达谱

来源 :南华大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:l13633332021
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[目的]本研究通过使用新一代测序技术来获得急性心肌梗死血清外泌体的miRNAs差异表达谱,从中筛选出差异显著的miRNA;研究差异表达的miRNA在急性心肌梗死诊断中的作用;找出与其相关的靶基因,阐明其在急性心肌梗死中的作用。[方法]本研究收集急性心肌梗死患者20例和健康成年人20例外周血标本,提取外泌体RNA,Western blot检测外泌体标记CD63和CD81表达变化,运用新一代测序技术结合生物信息学分析获得急性心肌梗死患者血清外泌体的miRNA差异表达谱;使用RT-PCR对初筛差异外泌体miRNA进行验证;对二次筛选出的miRNA进行靶基因预测,信号通路分析,GO注释,揭示其作用于急性心肌梗死的可能机制。[结果]1.急性心肌梗死患者的体重指数高于对照组,急性心肌梗死患者的肌钙蛋白T(c Tn T)、肌红蛋白、肌酸激酶(CK)和肌酸激酶同工酶(CK-MB)在急性心肌梗死中的表达水平均高于正常体检者(P<0.05)。2.AMI患者和对照组的血清外泌体中,均可以检测到CD63,CD81表达,但检测不到内参β-actin的表达。AMI患者和白细对照组胞中CD63,CD81表达很低,而β-actin表达。说明CD63,CD81可作为外泌体标记蛋白。3.mi RNA差异表达谱获得:从急性心肌梗死患者和对照组中共获得了89个mi RNA差异表达,包括63个表达上调和26个表达下调。4.实时荧光定量PCR对差异表达谱的验证结果:选取3个上调变化最大的mi R-1、mi R-133a、mi R208a,检测AMI患者和对照组中的表达情况,结果证实mi RNA基因上调的趋势与测序结果一致。5.生物信息学分析:五个软件共同预测的mi R-1调控的共同的交集基因有144个;mi R-133a调控的共同的交集基因有122个。mi R-208a调控的共同的交集基因有22个。[结论]1.获得了急性心肌梗死相关的mi RNA差异表达谱。2.3个mi RNA(mi R-1、mi R-133a、mi R-208a)有可能成为急性心肌梗死的潜在标志物。
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