低能离子诱变选育植物乳杆菌高产CLA菌株的研究

来源 :安徽农业大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:stbruce
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本研究以一株产共轭亚油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)的植物乳杆菌为出发菌株,以10 kev氮离子对出发菌进行多次诱变选育,以期得到一株高产CLA的诱变菌株,并且对该诱变菌株适宜产CLA的条件进行了研究,同时为了比较出发菌株和诱变菌株在分子水平的差异,利用30条随机引物对出发菌株和诱变菌株进行了RAPD比较分析,并且应用SDS-PAGE技术作为研究出发菌株和诱变菌株遗传突变分析的辅助手段。主要研究结果如下:1.在注入能量为10 keV,剂量为0(对照)120×2.6×1013 ions/cm2条件下对出发菌株ANCLA02进行诱变,结果表明:存活曲线与文献报道的“马鞍型”曲线基本符合。注入诱变高产CLA菌株的适宜剂量为60×2.6×1013 N+/cm2。筛选获得的诱变菌株ANCLA02的CLA产量为106.67μg/mL,比出发菌株提高了1.5倍。诱变菌株经5代培养,产CLA性能稳定。2.对诱变菌株适宜产CLA条件进行了初步研究,得到植物乳杆菌的最适产CLA条件为:亚油酸为诱导物,并且亚油酸添加量为0.1%,菌株的接种量为4%,初始PH为6.5,在37℃条件下发酵培养24小时,可使CLA产量达到最大。3.将出发菌株和诱变菌体进行全细胞蛋白电泳,比较出发菌株和诱变菌株菌体内蛋白质表达的差异,结果显示:出发菌株和诱变菌株在全细胞蛋白的表达上无差异。4.本试验共选用了30条随机引物,用他们对出发菌株和诱变菌株进行扩增,结果表明:低能离子注入引起了植物乳杆菌DNA的突变,在30条随机引物中,有4条引物在两池间有扩增产物,其中有两条在两池间表现出多态性,多态性扩增的引物频率为6.67%,且多态性稳定,重复性较好
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