背景和目的： 类风湿性关节炎(RA)是一种T细胞介导的，以滑膜炎为主要特征，同时伴有关节软骨及骨损伤的自身免疫性疾病。目前尚缺乏有效的治疗药物。由于RA的患病率高、致残率高、病因尚未完全阐明，特别是RA给社会经济、劳动力造成了严重损失，因此，对RA治疗的研究具有重要的医学和社会经济意义。骨保护素(OPG)属于肿瘤坏死因子受体(TNFR)超家族成员，研究表明OPG具有负向调节破骨细胞(OC)的分化和活化并促进OC凋亡，从而抑制骨吸收的功能；动物试验发现，T细胞在RA炎症的发生发展中起着重要作用，近年来的研究提示，热休克蛋白(HSP)可通过调节T细胞功能抑制RA的炎性反应。因此，为了解决类风湿性关节炎中骨破坏及炎症损伤两大难题，将人骨保护素的功能性基因片段与结核杆菌热休克蛋白70的基因片段连接，构建嵌合载体，进行原核表达，并对重组蛋白进行生物学活性鉴定，为进一步研究此重组蛋白对类风湿性关节炎的治疗作用奠定了基础。 实验方法及结果方法：采用反转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)从人骨肉瘤细胞系MG63总RNA中扩增骨保护素成熟肽段编码区基因，构建pGEM-TEasy-骨保护素重组质粒。以此为模板，用聚合酶链反应扩增骨保护素-热休克蛋白70功能区DNA，构建重组表达载体pET-28a-骨保护素-热休克蛋白70，将其转化Ecoli.BL21(DE3)，经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后收集菌体蛋白，以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白免疫印迹鉴定该重组蛋白的表达，以破骨细胞生长抑制试验及抑炎试验检测该重组蛋白的生物学活性。 结果：获得人骨保护素全长基因片段；人骨保护素．热休克蛋白70(OPG-HSP70)功能区DNA片段被正确插入到pET-28a载体中；转化菌株可表达人骨保护素-热休克蛋白70重组蛋白；SDS-PAGE分析显示在蛋白分子量约为22KD处有蛋白的超表达，而未诱导菌株未发现有此条带；蛋白免疫印迹检测表明重组蛋白能与抗人骨保护素单克隆抗体特异性结合；破骨细胞生长抑制试验表明该重组蛋白能够减少破骨细胞的生成数量，具有体外抑制骨破坏的生物活性；抑炎试验表明重组蛋白具有显著减轻迟发型超敏反应(DTH)小鼠模型炎症反应程度的作用，说明重组蛋白中HSP70片段具有抑制炎症的生物学活性。 结论：成功构建出pET-28a-OPG-HSP70重组质粒，在Ecoli.BL21(DE3)中表达出骨保护素-热休克蛋白70重组蛋白，体外功能试验证实该重组蛋白具有抑制破骨细胞生长和抑炎的生物学活性。