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颞下颌关节疾病的发生往往与髁突软骨组织异常的代谢状态存在关联,髁突软骨细胞是髁突软骨中最主要的细胞成分。髁突软骨细胞与颞下颌关节适应外周环境刺激进行功能性改建,维持软骨组织基质的完整性等方面均有着密不可分的作用。雌激素对于软骨的早期发育、成熟以及维持软骨组织的正常功能和形态都有着重要作用。机体内雌激素水平的异常变化容易导致髁突软骨细胞增殖和分化状态的改变,继而可能诱发颞下颌关节疾病。雌激素相关受体α(estrogen-related receptor α, ERRα)属于孤儿核受体的家族成员之一,与雌激素受体(estrogenreceptors, ERs)有着同源性。表面上ERRα不直接以受体配体形式结合雌激素,但却可以通过共激活因子与雌激素受体作用,参与雌激素辅助转导体系进而影响雌激素的信号通路。越来越多的研究证实ERRα能够激活或者抑制涉及不同代谢途径的多种目标基因,在控制动物代谢平衡中起到了至关重要的作用。ERRα是否在髁突软骨组织中存在表达?其表达情况是否会受雌激素不同环境的影响,以及对髁突软骨细胞的代谢调节存在哪些作用?这些问题目前均尚未明确。研究ERRα在大鼠髁突软骨代谢中的调控作用,有利于更深刻地了解正畸临床矫形治疗过程中髁突适应性改建的生理基础,对认识颞颌关节疾病的发生发展并提供新的治疗策略有着非常重要的意义。研究目的(1)研究ERRα在雌性SD大鼠髁突软骨组织与细胞中的表达分布(2)研究去势雌性SD大鼠体内髁突软骨组织中ERRα以及软骨特异性标志物表达的变化(3)研究雌激素刺激对体外培养大鼠MCC生物学特性和ERRα表达的影响(4)探讨ERRα在调控大鼠MCC生物学特性的作用机理研究方法(1)利用密度梯度离心和贴壁法相结合分离培养雌性SD大鼠MCC,并采用Ⅱ型胶原抗体染色和阿尔新蓝染色鉴定软骨细胞表型特征。采用免疫组化和免疫荧光染色对髁突软骨细胞和组织中ERRα的表达分布进行观察。(2)将雌性SD大鼠分为OVX处理组与假手术Sham组,采用Real timeRT-PCR分析OVX后体内髁突软骨组织特异性标志物和ERRα表达的变化。(3)通过E2(10-8M)对体外培养的雌性SD大鼠MCC进行刺激,采用Real timeRT-PCR和Western Blot分别对MCC生物学特性相关标志物和ERRα表达的变化进行观察。WST-1检测雌激素刺激与化学制剂XCT790抑制ERRα表达后MCC的增殖变化情况。(4)对MCC采用脂质体瞬时转染和化学制剂XCT790分别过表达和抑制ERRα,通过Real time RT-PCR和WesternBlot分别对髁突软骨特异性标志物的变化进行检测,明确ERRα在髁突软骨调控中的作用机理。实验结果(1)细胞Ⅱ型胶原荧光染色和阿尔新蓝染色结果均为阳性,证实提取培养的细胞具有髁突软骨细胞表型。免疫荧光和免疫组化染色显示,ERRα表达于TMJ各层软骨细胞中,MCC的胞核与胞质中均存在ERRα表达。(2)对大鼠OVX后体内髁突软骨组织进行Real time RT-PCR检测,结果显示:雌性SD大鼠OVX1周后,ERRα、Sox9、GDF-5和Aromatase表达下降,Col2a1没有显著变化;去势4,8,12周后ERRα、Sox9、Aromatase表达升高,GDF-5和Col2a1表达下降。OVX后软骨细胞增殖能力总体呈升高趋势,但细胞成熟的标志物表达下降。(3) Real time RT-PCR与Western Blot检测显示E2(10-8M)对体外培养MCC的ERRα及MCC增殖、分化、成熟相关标志物的表达均存在促进作用。WST-1检测显示E2(10-8M)可以促进体外培养的MCC增殖,XCT790抑制ERRα表达后可以降低E2(10-8M)促进MCC增殖的效果。(4) MCC经转染过表达ERRα与XCT790抑制ERRα后,Real time RT-PCR与Western Blot检测均显示:ERRα正向调控Sox9与GDF-5的变化,Aromatase和Col2a1的表达无明显变化。ERRα通过调控Sox9与GDF-5进而影响MCC的增殖与分化。结论(1)雌性SD大鼠MCC胞核与胞浆中均存在ERRα表达,并在TMJ软骨各层中均有分布。(2) OVX后因雌激素缺乏可以引起短期内ERRα的表达下降,而后期总体呈升高趋势,ERRα表达的变化受雌激素直接或者间接作用影响。(3)生理浓度的雌激素对体外培养的MCC增殖和分化能力均有促进作用,ERRα介导了雌激素促进MCC增殖的作用。雌激素对ERRα存在双向调控作用。(4) ERRα通过上调Sox9和GDF-5的表达进而促进软骨早期增殖与分化。