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目的:课题组前期研究表明:CRMP4是新的前列腺癌转移抑制基因;miR-101可通过下调EZH2的表达,继而上调CRMP4表达,从而抑制前列腺癌细胞的转移。本研究拟探讨前列腺癌PC3细胞系中miR-101对CRMP4基因启动子区甲基化的调控作用以及miR-101上调CRMP4的表达后是否可抑制其在体外的迁移及侵袭能力。方法:采用构建pre-miRNA-101以及siRNA EZH2质粒,使用Lipofectamine2000分别将和转染入PC3细胞中,同时使用可抑制EZH2组蛋白甲基转移酶活性的3-Deazaneplanocin A(DZNep)处理前列腺癌PC3细胞作为对照,采用甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR,MSP)检测CRMP4基因在前列腺癌PC3细胞中基因启动子甲基化状态的变化。采用划痕实验及transwell评估转染前后的细胞迁移及侵袭能力的改变。结果:构建pre-miRNA-101以及siRNA EZH2质粒,使用Lipofectamine2000分别将其转染入PC3细胞中,转染效率均大于80%,48h后real-time RT-PCR Pre-miRNA-101组和siRNA EZH2组结果均显示:前列腺癌PC3细胞实验组和阴性及空白对照组相对比,CRMP4 mRNA的表达水平明显上升(P﹤0.05),EZH2 mRNA的表达水平明显下降(P﹤0.05),而阴性对照组和空白对照组比较CRMP4、EZH2的表达量相差不大(P>0.05),甲基化特异性PCR(MSP)显示:转染pre-miRNA-101以及siRNA EZH2质粒及DZNEP处理的PC3细胞中CRMP4基因启动子区甲基化程度与对照组细胞相比明显下降(P﹤0.05),而非甲基化程度相差不大(P>0.05),细胞划痕实验和Transwell显示细胞的迁移和侵袭能力均明显弱于阴性和空白对照组(P<0.05)。结论:(1)miRNA-101表达上调后在前列腺癌PC3细胞中可下调EZH2的表达,从而调控CRMP4基因的DNA甲基化,进而促进CRMP4基因转录,导致CRMP4表达上调。(2)miRNA-101可通过上调CRMP4的表达抑制前列腺癌PC3细胞的侵袭与转移。