水疱性口炎(Vesicular Stomatitis,VS)被世界动物卫生组织(OIE)列为A类传染病,在我国进出境动物检疫对象中被列为二类病,尽管目前我国还没有该病流行的报道,但随着我国加入WTO,动物及动物产品的国际贸易增加,为防止国外疫情流入我国,保护我国畜牧业的健康发展,有必要对该病进行研究。VS由弹状病毒科水疱病毒属的水疱性口炎病毒(Vesicular Stomatitis Virus,VSV)引起的牛、马、猪等多种哺乳动物的一种急性、高度接触性传染病。VSV由5种不同的主要蛋白构成,分别为核(N)蛋白、磷酸(P)蛋白、基质(M)蛋白、糖(G)蛋白及RNA聚合酶(L)蛋白,其中核蛋白和糖蛋白在病毒免疫和诊断具有重要的意义;N蛋白是病毒衣壳蛋白,由N基因编码,呈群特异性,刺激机体产生非中和抗体;G蛋白由G基因编码,是病毒的主要抗原,决定着病毒的毒力,也是病毒的保护性抗原,它能刺激机体产生中和抗体,呈现型、亚型、乃至株的特异性。根据文献报道,利用PCR技术扩增编码水疱性口炎病毒IND型(VSV-IND)糖蛋白(G)基因不含信号肽、胞内区和跨膜区的主要抗原表位区,通过引入其两端的EcoR I和Xho I酶切位点定向插入到pET-30c质粒T7启动子下游的多克隆区,构建重组质粒pET-30c-vsvG并转化至宿主菌BL21(DE3)株中。用1 mmol/L IPTG诱导后,SDS-PAGE电泳表明重组蛋白在大肠杆菌中得到了高效表达,经过4 h表达量即可达到高峰,重组蛋白的相对分子质量为57 ku;Western-blot检测证明,所表达的重组蛋白能被VSV-IND阳性血清所识别。重组蛋白含有六聚组氨酸尾,主要以包涵体形式存在,经镍柱纯化后作为包被抗原建立了间接ELISA,试验证明其具有较高的抗原活性,且具有良好的型特异性,纯化后的重组蛋白有望在LP-ELISA中取代全病毒成为标准的诊断抗原和用于基因工程疫苗的研制。本研究还针对FMDV的3D基因、SVDV的VP1基因与VSV的N基因设计了三对引物,建立了多重RT-PCR,可以一次性检测出VSV、FMDV和SVDV的单独或混合感染。应用该方法可以比较简单且经济的鉴别猪的三种水泡性疾病,由于其特异、敏感、快速、简便,故有广阔的应用前景。