狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒引起的一种致死性人畜共患传染病。一般通过感染动物的咬、抓伤传播。病毒侵害人和动物的神经系统。该病死亡率极高，一旦发病几乎全部死亡。目前我国属于世界上狂犬病严重流行的国家之一。据调查，有些被咬伤者及时注射了疫苗，但仍发生了狂犬病。导致感染发病的原因之一，是在机体产生特异性中和抗体之前，病毒就已经大量繁殖并侵入了神经组织内。因此，在疫苗免疫应答产生前阻断狂犬病病毒复制，是防止疫苗接种后狂犬病发生的关键环节之一。 RNA干扰(RNA interference，RNAi)是首先在线虫体内发现的一种由小RNA(short-interfering RNA，siRNA)诱发的转录后基因沉默(Post-transeriptional gene silencing，PTGS)现象，即21-23nt的小双链RNA分子在体内与互补的mRNA特异性结合后，可以诱导细胞内的RNAi核酸酶对mRNA的快速降解，使基因表达中断。 本研究利用siRNA的干涉作用研究特异性siRNA对狂犬病病毒复制的抑制作用。针对翻译狂犬病病毒糖蛋白(G)和核蛋白(N)的mRNA各设计出3对特异的siRNA的转录前体-小DNA分子，合成后克隆到载体pSiencer2.1-U6中，经测序成功获得了转录载体。然后将转录载体转染BHK-21细胞。采用稳定转染和瞬时转染两种方式。获得稳定转染的BHK-21细胞后，按1％比例接种狂犬病病毒8202，48h后采用直接免疫荧光和RT-PCR检测狂犬病病毒的复制情况，结果表明：N19对狂犬病病毒复制的干扰效果最好；G69次之；G18、G21起到了一些干扰作用，但效果不明显；N35、N38没有干扰效果。瞬时转染时同步接毒，48h后同样采用直接免疫荧光检测狂犬病病毒的复制情况，结果表明：瞬时转染时siRNA的干扰效果不理想。将稳定转染后的BHK-21-G69、BHK-21-N19细胞的裂解物和转录载体pSiencer2.1-U6-siRNA-G69、pSiencer2.1-U6-siRNA-N19分别注射接种过狂犬病病毒的小鼠，注射细胞裂解物小鼠的死亡率与只接种狂犬病病毒的小鼠的死亡率无明显差别；注射转录载体小鼠的死亡率明显低于只注射狂犬病病毒小鼠的死亡率，说明siRNA的转录载体释放出的siRNA可以在小鼠体内阻止狂犬病病毒的复制。