蛋白质翻译后S-脂修饰质谱分析方法研究

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蛋白质翻译后S-脂修饰主要指含16个碳原子的棕榈酸或其他长链脂肪酸与蛋白质半胱氨酸自由巯基的共价结合。与其他脂修饰相比,这种脂修饰具有可逆性,因而可调控,对细胞和组织内蛋白质的转运、膜锚定及酶的活性具有重要作用。由于蛋白质S-脂修饰多发生在膜蛋白和与膜相关的蛋白质中,而膜蛋白通常在细胞中丰度较低,因此本文主要针对低丰度S-脂修饰多肽的选择性富集,开展了以下几个方面的研究:(1) Fe3O4/Au磁性纳米复合材料的制备及表征。本文首先通过化学共沉淀法合成磁性Fe304纳米颗粒,再采用柠檬酸钠还原HAuCl4,在其表面包覆Au。实验证明,本法制得的Fe3O4/Au磁性纳米复合材料颗粒均匀,不仅具有较好的磁性,而且在水溶液中分散性好。(2)基于Fe3O4/Au磁性纳米复合材料的S-脂修饰多肽选择性富集及质谱分析方法研究。利用Au与含有游离巯基多肽的选择性结合,本文建立了S-脂修饰多肽的快速亲和富集方法,在外加磁场作用下实现目标物与复杂生物基质的分离,并与高灵敏MALDI-Q-TOF质谱分析方法结合,实现对S-脂修饰多肽的质谱鉴定。(3)纳米孔状结构多孔氧化铝膜的制备及表征。本文采用阳极氧化法制备了氧化铝膜,并研究了多孔膜的形成机理和反应条件。结果表明本法制得的氧化铝膜表面孔道分布高度有序,孔径均一,有望应用于进一步的生物样品分析中。
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