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背景:口腔鳞状细胞癌（OSCC）是口腔最常见的恶性肿瘤,其淋巴结转移率高。目前组织活检是OSCC确诊的金标准,大多数OSCC在被发现并确诊时都已达到疾病的中、晚期或已发生转移。转移是OSCC患者死亡的主要原因。当患者发生淋巴结转移时,五年存活率从80%急剧下降到40%以下。近年来研究发现外泌体可能在解释肿瘤的转移和复发中发挥重要作用,而microRNA（miRNA）是外泌体的内含物之一,越来越多的研究表明miRNA与癌症的发生发展有关。血清来源的外泌体miRNA具有独特的表达谱,可以反映恶性肿瘤的特征。据我们所知,目前还没有关于循环外泌体miRNA在OSCC转移和复发中意义的报道。目的:本研究为检测循环外泌体miRNA在人类OSCC中的表达;探寻OSCC中差异miRNA的疾病诊断能力,以得到一种新的有效辅助诊断标志物;并探讨OSCC转移组中的差异miRNA对该肿瘤功能作用的影响,以期为OSCC的发生发展提供新的理论依据。方法:（1）采用超高速离心法收集OSCC患者（包括有淋巴结转移患者、无淋巴结转移患者及复发患者）、口腔粘膜白斑患者、其他口腔肿瘤患者以及健康对照人群的血清外泌体各30例,并用蛋白质免疫印迹（WB）以及透射电镜对其进行鉴定。（2）用高通量测序方法探究OSCC中miRNA的表达谱,采用生物信息学分析方法筛选出不同比较组中差异表达的miRNA,并进行GO分析和KEGG分析。（3）筛选出OSCC淋巴结转移组较其他各组的差异表达miRNA,并对其结果进行聚类分析。（4）选择出OSCC淋巴结转移组较其他各组的一组差异表达miRNA为mi R-548ah-5p,提取血清外泌体总RNA并进行miRNA的逆转录后,用实时荧光定量PCR（q PCR）法检测mi R-548ah-5p在各比较组中的表达情况,以进一步验证测序结果。（5）根据mi R-548ah-5p在OSCC患者血清外泌体中的相对表达量,分析其与临床病理参数之间的关系,并通过ROC曲线判断该目的基因的疾病诊断能力。（6）构建mi R-548ah-5p过表达组、沉默表达组及对照组口腔癌细胞稳定株,并探讨mi R-548ah-5p对口腔癌细胞CAL27、SCC9的生物学功能的影响。结果:（1）提取的血清外泌体在透射电镜下观察,可见外泌体形态呈圆形或类圆形的囊泡状小体,边缘可见双层膜结构,直径大小约为30-150nm不等;WB检测外泌体标志蛋白得到HSP70、CD9以及CD63的表达均呈阳性。（2）根据生物信息学分析结果可知:在有淋巴结转移的口腔鳞癌（OSCC-LNM）组与无淋巴结转移的口腔鳞癌（OSCC-NLNM）组及复发的口腔鳞癌（ROSCC）组相比较时发现,OSCC-LNM组有7个miRNA的表达水平显著增高,4个miRNA的表达量显著降低;在ROSCC组与OSCC-LNM和OSCC-NLNM相比较时,ROSCC组有1个miRNA显著上调,29个显著下调;在ROSCC组与健康对照（HCs）组、口腔粘膜白斑（OL）组及其他口腔肿瘤（OOTs）组比较时,ROSCC组中总共有42个差异表达的miRNA,其中包括16个上调表达和26个下调表达;在OSCC-LNM组与HCs组、OL组及OOTs组比较时,OSCC-LNM组较其他组总共有4个miRNA的表达显著上调;在ROSCC组与HCs组、OL组、OSCC-LNM组、OSCC-NLNM组及OOTs组比较时,ROSCC组较其余5个组有14个明显下调表达的miRNA;在OSCC-LNM组与HCs组、OL组、ROSCC组、OSCC-NLNM组和OOTs组相比较时,我们发现Mi R-548ah-5p是OSCC-LNM组较其余5组中唯一一个显著上调的miRNA,且差异有统计学意义。（3）GO分析表明各比较组中的差异miRNA在细胞代谢过程、细胞及细胞组分、结合和蛋白结合等方面均显著富集;KEGG分析结果可知各不同比较组的靶基因均在癌症途径以及癌症的miRNAs等通路富集。（4）筛选出OSCC淋巴结转移组较其余5组中唯一一个显著上调的miRNA为mi R-548ah-5p,q PCR方法验证其表达与测序结果一致。（5）从OSCC血清外泌体中的mi R-548ah-5p的表达与临床病理参数的相关性分析可知,mi R-548ah-5p在低分化的口腔鳞癌较高分化的口腔鳞癌的血清外泌体中的相对表达量高,且差异有统计学意义（P<0.05）,其余临床病理参数,如性别、民族、临床分期、吸烟饮酒等均未见明显差异。（6）随时间的增加,在转染的SCC9及CAL27细胞中mi R-548ah-5p过表达组的生长速度较阴性对照组和沉默表达组快,而沉默表达组的增长速度仅稍慢于阴性对照组,差异有统计学意义（P<0.05）;mi R-548ah-5p过表达及沉默表达的SCC9及CAL27细胞间的迁移、侵袭能力未见明显差异。结论:（1）OSCC患者与对照人群的血清外泌体中的miRNA存在差异表达。（2）血清外泌体mi R-548ah-5p可能与OSCC的分化程度有关,其可作为OSCC淋巴结转移患者的辅助诊断工具,也可能对OSCC患者的预后情况起一定的指导作用。（3）mi R-548ah-5p对CAL27和SCC9细胞的增殖能力有一定的促进作用,但该目的基因对OSCC细胞的迁移和侵袭能力未见明显作用。